科研产出
乌桕Cu/Zn超氧化物歧化酶基因克隆及耐盐性
《四川师范大学学报(自然科学版) 》 2016 北大核心
摘要：利用RT-PCR和RACE技术,成功获得了乌桕Cu/Zn超氧化物歧化酶(SsCu/Zn SOD)的cDNA全长.该序列含有486 bp的完整开放阅读框(Gen Bank登录号为KX169161),编码161个氨基酸残基,推测其相对分子质量为16.304 k Da,等电点为6.57.对应开放阅读框的基因组序列含有7个外显子和6个内含子.同源性及保守结构域分析显示SsCu/Zn SOD和其他物种的Cu/Zn SOD有较高的同源性(67.26%~88.69%),含有一个保守的活性区.构建原核表达载体p ET32-SsCu/Zn SOD在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,诱导出目的蛋白.转化菌的盐胁迫实验显示,其具有抗盐胁迫的功能.
关键词： SsCu/Zn超氧化物歧化酶基因 克隆 原核表达 盐胁迫
全文链接
请求原文
拟南芥SAT1蛋白的原核表达及抗体制备
《分子植物育种 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：丝氨酸乙酰转移酶(serine acetyltransferase,SAT)是甲硫氨酸和半胱氨酸合成途径的关键酶,利用该基因提高作物中甲硫氨酸水平具有广阔的应用前景。为了研究拟南芥SAT1(Arabidopsis thaliana SAT1)基因的蛋白表达情况及相关功能,构建了带有His标签的AtSAT1基因原核表达载体p ET-30b(+)-SAT1-His(6)。将其导入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经固定化金属离子亲和层析(IMAC)纯化获得了抗原蛋白SAT1-His(6)。该抗原蛋白经免疫兔子,成功制备了具有较高特异性和灵敏性的SAT1蛋白多克隆抗体。Western blotting表明,该抗体可用来检测转AtSAT1基因的转基因玉米株系中SAT1蛋白的积累量,为后期对该基因开展进一步深入研究具有重要意义。
全文链接
请求原文
饥饿胁迫对瓦氏黄颡鱼脂肪代谢的影响
《水生生物学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：在水温(25±2)℃条件下,对初始体重为(23.65±2.82)g的瓦氏黄颡鱼进行30d饥饿处理,于饥饿第0、第7、第15和第30天取样,分析了饥饿胁迫对瓦氏黄颡鱼的生长、体成分、脂肪酸组成和脂肪代谢相关基因表达的影响。结果表明:饥饿胁迫显著降低了瓦氏黄颡鱼肥满度、脂体比及肝体指数(P<0.05)。肌肉脂肪含量也随着饥饿时间的延长而下降(P>0.05)。肝脏中的饱和脂肪酸和肌肉中的单不饱和脂肪酸显著下降,而肝脏中多不饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸及肌肉中的多不饱和脂肪酸显著上升(P<0.05)。此外,肌肉中的n-6和n-3及肝脏中的n-6多不饱和脂肪酸显著上升,而肝脏中的n-3多不饱和脂肪酸显著下降(P<0.05),表明瓦氏黄颡鱼饥饿期间主要消耗饱和脂肪酸及单不饱和脂肪酸供能,保留多不饱和脂肪酸。饥饿胁迫15—30d,瓦氏黄颡鱼肝脏脂蛋白酯酶、肝酯酶及肉碱酰基转运酶m RNA表达显著高于对照组(0d)(P<0.05),而脂肪酸结合蛋白及脂肪酸合成酶m RNA的表达显著低于对照组(P<0.05),表明饥饿胁迫可能会促进肝脏脂肪分解供能,降低脂肪的生物合成。
全文链接
请求原文
烟草C3HC4型锌指蛋白的原核表达及转基因植株功能研究
《生物技术通报 》 2014 北大核心
摘要：植物中C3HC4型RING锌指蛋白在泛素化、光形态建成、抗逆及生长发育等过程中均起到非常重要的作用。首次从本生烟中扩增获得一个锌指蛋白基因的完整阅读框,编码203个氨基酸,含有C3HC4型锌指结构域,命名为NbZFP1。将NbZFP1基因分别克隆到原核表达系统载体pGEX-6P-2以及pMAL-C2X中,成功构建了重组表达载体pGEX-6P-2-NbZFP1与pMALC2X-NbZFP1,经IPTG获得了大量可溶性表达的NbZFP1融合蛋白。将NbZFP1基因克隆于植物表达载体pBI121中,通过农杆菌介导法获得转基因烟草,PCR检测及Southern blot分析表明NbZFP1基因已整合到烟草基因组中,转NbZFP1基因烟草表现出株型紧凑,节间缩短,茎干粗壮和对TMV抗性增强。
甘薯HXK基因的克隆、组织表达及生物信息分析
《四川大学学报(自然科学版) 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：通过RT-PCR技术从甘薯的总RNA中克隆得到了全长的己糖激酶基因,测序结果表明HXK(hexokinase)基因编码区长1491bp,编码496个氨基酸,其翻译的蛋白质分子量为53.4kD,其氨基酸序列与其它已知高等植物HXK基因具有很高的同源性.构建了原核表达载体pET-HXK,经IPTG诱导后可表达获得相对分子量约为71kD的外源融合蛋白,与预测结果一致.并对HXK基因在不同组织中的转录水平进行了数字表达谱和荧光定量分析.
全文链接
请求原文
枇杷黄肉和白肉突变体类胡萝卜素基因的克隆和表达分析(英文)
《农业科学与技术(英文版) 》 2013
摘要：[目的]探索黄肉枇杷果实类胡萝卜积累的调控机制.[方法]该研究以枇杷突变体(黄肉枇杷一枝芽变结出白肉果实)为供试材料,利用高效液相色谱测定成熟果肉中β-胡萝卜素的积累,对野生型和突变型枇杷类胡萝卜素合成途径基因进行同源克隆及表达分析.[结果]野生型黄肉和突变体白肉枇杷成熟果肉中β-胡萝卜素含量分别为60.9和4.6μg/g;利用同源克隆获得的5个枇杷类胡萝卜素合成基因编码区序列在野生型和突变型没有发现核苷酸变异;实时荧光定量PCR分析显示类胡萝卜素β环羟化酶基因在突变体白肉果实中的表达显著降低,其它6个类胡萝卜素合成途径基因在两供试材料中的表达水平没有差异,与β-胡萝卜素的积累没有直接关联.[结论]突变体白肉枇杷缺少β-胡萝卜素的积累可能与类胡萝卜素β环羟化酶基因表达量下调有关.
关键词： β-胡萝卜素 β环羟化酶基因 果肉颜色 基因表达 枇杷
全文链接
请求原文
家蚕B型清道夫受体基因的鉴定及系统发生与表达分析
《蚕业科学 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：B型清道夫受体(SR-B)是清道夫受体超基因家族成员,参与机体的脂类代谢、动脉粥样硬化形成或保护、宿主免疫损害防御、凋亡细胞清除和细胞粘附等重要生命过程。基于家蚕全基因组数据,利用比较基因组学方法,鉴定获得了14个家蚕B型清道夫受体基因,这些基因分布在至少5条染色体上,其内含子的大小从几十到近万个碱基对。系统发生分析表明,14个家蚕B型清道夫受体基因分布在3个类群:第1类群中分布的9个基因和第3类群中分布的3个基因,分别与类群中其它昆虫的同源基因形成明显的直系同源关系;第2类群中分布有2个基因,此类群中不同昆虫的同源基因之间的进化关系较为复杂。EST数据和芯片数据分析表明,多数家蚕B型清道夫受体基因具有转录活性。RT-PCR检测结果显示,有8个家蚕B型清道夫受体基因在5龄第3天幼虫组织中表达,并具有不同的表达模式,推测这些基因可能行使不同的功能。研究结果为进一步诠释家蚕B型清道夫受体基因的功能奠定了基础。
关键词： 家蚕 B型清道夫受体基因 生物信息学分析 系统发生 组织表达
全文链接
请求原文
籼稻姊妹染色单体粘着蛋白OsRad21-i基因的原核表达载体构建与表达
《中山大学学报(自然科学版) 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：以杂交水稻汕优63的根组织cDNA为模板,采用引物设计引入酶切位点和RT-PCR方法,扩增出了籼稻姊妹染色单体粘着基因OsRad21-i(AY318757)开放阅读框(ORF),命名为Eqfr,两端分别带有BamHⅠ和SalⅠ限制性位点。然后克隆到pGEM-T载体,将重组克隆载体pGEM-T-Eqfr与表达载体pQE30分别同时进行BamHⅠ和SalⅠ双酶切,连接酶切后的Eqfr和pQE30,并转化DH5α感受态细胞,获得了DH5α[pQE30-Eqfr]重组克隆。再以其重组质粒转化M15[pREP-4]感受态细胞,筛选出M15[pQE30-Eqfr,pREP-4]重组克隆。通过诱导表达,检测到了相对分子质量约为116 000的重组蛋白表达,在诱导后的1~3 h里表达量较高,之后表达量开始下降。用实验证实了理论推测ORF的正确性,所获得的表达蛋白及其表达体系为下一步的蛋白质实验奠定了基础。
关键词： 杂交籼稻 姊妹染色单体粘着蛋白 OsRad21-i 原核表达 载体构建
全文链接
请求原文
家蚕淀粉酶基因(Bmamy2)的分子克隆及表达特征和序列分析
《蚕业科学 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：淀粉酶在生物体内的碳水化合物代谢中起重要作用。根据预测的基因序列设计引物,克隆了一个家蚕淀粉酶基因(Bmamy2),获得完整的编码区序列(全长1 752 bp,编码583个aa)。用推导的氨基酸序列与其它物种的淀粉酶基因作相似性比较和系统发育分析,发现所克隆的Bmamy2基因是一个起源很早的拷贝,在细菌、果蝇、非洲蟾蜍、人和鸡等多种生物中存在与之同源的基因。该基因编码蛋白的功能结构域预测有2个起催化作用的关键氨基酸发生突变,推测该基因可能失去了催化水解碳水化合物的功能。RT-PCR和基因芯片检测结果表明,该基因在家蚕5龄第3天幼虫的中肠和脂肪体中表达,且在中肠中的表达丰度较高。
全文链接
请求原文
葡萄A病毒四川分离物的外壳蛋白基因克隆与原核表达
《园艺学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)是葡萄病毒属(Vitivirus)的典型种,在世界葡萄产区广泛分布。采集10株‘藤稔’葡萄成熟枝条,使用6种葡萄病毒ELISA试剂盒检测发现,10个样本中有6个感染4种不同的葡萄病毒。以GVA的ELISA阳性植株为材料进行RT-PCR扩增,首次获得了GVA四川分离物SL10的完整外壳蛋白基因(CP),该基因全长597bp。将其与GenBank收录的15个GVA分离物的CP序列进行比对和构建系统进化树,把不同地理起源的GVA分离物分成两个变异组,其中Ⅰ组包括3个分离物(与Ⅱ组的其他分离物只有75.9%~80.1%的序列同一性);其余的13个分离物组成Ⅱ组(组内分离物具有84.4%~99.5%的序列同一性)。构建了GVACP的原核表达质粒PET-30-GVAcp并转化BL21菌株,经IPTG诱导,目的基因得到了大量表达。
关键词： 葡萄 葡萄A病毒 ELISA RT-PCR 外壳蛋白基因 原核表达
全文链接
请求原文
