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拟南芥SAT1蛋白的原核表达及抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 向小利 1 ; 余桂容 1 ; 宋军 1 ; 蒲志刚 1 ; 徐利远 1 ;

作者机构： 1.四川省农业科学院丹东农业科学院四川农业大学玉米研究所

关键词： 拟南芥;丝氨酸乙酰转移酶;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2016 年 14 卷 06 期

页码： 1369-1375

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 丝氨酸乙酰转移酶(serine acetyltransferase,SAT)是甲硫氨酸和半胱氨酸合成途径的关键酶,利用该基因提高作物中甲硫氨酸水平具有广阔的应用前景。为了研究拟南芥SAT1(Arabidopsis thaliana SAT1)基因的蛋白表达情况及相关功能,构建了带有His标签的AtSAT1基因原核表达载体p ET-30b(+)-SAT1-His(6)。将其导入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经固定化金属离子亲和层析(IMAC)纯化获得了抗原蛋白SAT1-His(6)。该抗原蛋白经免疫兔子,成功制备了具有较高特异性和灵敏性的SAT1蛋白多克隆抗体。Western blotting表明,该抗体可用来检测转AtSAT1基因的转基因玉米株系中SAT1蛋白的积累量,为后期对该基因开展进一步深入研究具有重要意义。

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