科研产出
环境变化对水稻osfh1突变体成蛋白家族表达的影响
《广西植物 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：水稻成蛋白基因成员OsFH1在水稻根毛的生长发育中起着关键作用，这一过程受到环境因素的调控，当前的研究对环境因素如何与OsFH1互作调控水稻根毛的机制尚未阐明。为探索水稻成蛋白成员是否在环境因素介导的osfh1突变体根毛表型恢复中发挥作用，该研究使用1/2 MS液体培养液与1/2 MS固体培养基处理osfh1突变体，通过qRT-PCR技术分析成蛋白家族成员表达量，并对成蛋白家族进行生物信息学分析。结果表明：（1）与野生型相比，在液培中osfh1突变体主根根毛缺失，地上部分较短，侧根数量增加，在固体培养中osfh1突变体根毛缺失表型得到恢复。（2）与野生型相比，当osfh1突变体从液培到固培环境时，OsFH16表达量下降，OsFH17表达量上升，并且差异显著。（3）OsFH1、OsFH16、OsFH17都是第一类成蛋白亚家族成员，都具有生长素、赤霉素以及厌氧等与环境胁迫相关顺式作用元件，并且预测到OsFH1、OsFH16和OsFH17定位于质膜行使功能。（4）OsFHs在不同组织的表达模式分析表明，OsFH1在根部表达水平较高，而OsFH16、OsFH17在根部表达量相对较低。综上认为，由于OsFH16、OsFH17、OsFH1之间亲缘关系较高，调控模式相近且三者都可能在细胞质膜上行使功能，因此OsFH16、OsFH17可能参与环境因素与osfh1共同改变根毛表型这一过程。该研究结果为解析环境与osfh1基因共同调控水稻根毛发育机制奠定了一定理论基础，为探索植物成蛋白基因功能提出了新方向。
关键词： 成蛋白 OsFH1 根毛 qRT-PCR 水稻 生物信息分析
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实时定量PCR评估金针菇的内参基因稳定性
《菌物学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：金针菇在中国和日本是最受人喜爱的食用菌之一,在重要栽培食用菌中产销量排名第四。近年来,已在活性物质、分子标记及基因鉴定方面开展了大量工作,但未见有金针菇内参基因稳定性研究的报道,导致金针菇基因表达研究无内源参考基因稳定性数据作为参考。本研究采用ge Norm、Norm Finder、Best Keeper和Ref Finder4种软件评估18S核糖体RNA（18S）、28S核糖体RNA（28S）、60S核糖体蛋白L18（Rpl18）、肌动蛋白1（Act1）、3-磷酸甘油醛脱氢酶（Gapdh）、翻译延伸因子EF1-alpha（Ef1A）、DNA指导的RNA聚合酶亚基2（Rpb2）、细胞色素C氧化酶亚基1（Cox1）及细胞色素b（Cyt B）等9个内参基因的稳定性。综合分析结果显示,单个基因中Act1基因最稳定,Cyt B表达稳定性最差,但单个候选内参基因的稳定性不能够满足定量PCR实验要求;根据ge Norm软件分析结果,Cyt B和Rpb2是金针菇定量PCR的稳定内参基因组合。本研究首次评估了金针菇的内参基因稳定性,将为后续的基因表达研究提供参考。
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桂花OfF3'H基因的克隆与表达分析
《分子植物育种 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：类黄酮3'-羟化酶(F3'H)属于细胞色素P450单加氧酶家族,是苯丙烷类代谢途径关键成员,在植物色泽形成及类黄酮成分调控方面起重要作用。本研究以四季桂‘金玉台阁’为实验材料,采用cDNA末端快速扩增法(RACE)从盛花末期小花cDNA中克隆了桂花OfF3'H基因(GenBank编号:MH509392)。序列分析结果显示该基因全长为1 856 bp,其中5'端非翻译区长度为102 bp,3'端非翻译区长度为191 bp,开放阅读框长度为1 563 bp,编码由520个氨基酸残基组成的蛋白质。系统进化分析表明Of F3'H含有植物F3'H蛋白典型的保守结构域,且与猕猴桃的AcF3'H蛋白亲缘关系最近。桂花花期不同阶段生理与分子研究发现初花期OfF3'H基因表达量和总黄酮含量均为最低,而花谢期OfF3'H基因表达量和总黄酮含量达到最高。此外,Of F3'H存在10个潜在的磷酸化位点,其中第83位点的丝氨酸和第304位点的苏氨酸在不同植物间高度保守。本研究为深入研究桂花花色形成及植物类黄酮合成调控的分子机制提供一定的理论依据。
关键词： 桂花 类黄酮3'-羟化酶 荧光定量PCR 总黄酮含量 磷酸化修饰
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实时荧光定量PCR法定量微生物的条件及在鱼露和虾油微生物检测中的应用研究
《食品与发酵工业 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：文中研究了以实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)定量细菌和真菌数量的条件,通过比较多对引物的扩增效果,确定分别采用16S rDNA细菌通用引物63F-335R和18S rDNA真菌通用引物0817F-1196R扩增细菌和真菌,并确定退火温度均为60℃。采用多种细菌和真菌对上述条件进行验证,结果显示,无论单一菌种或混合菌种,在上述条件下扩增效率E均在90%~120%范围内,所得标准曲线决定系数R~2>0.98,符合定量要求。用此方法定量鱼露和虾油的微生物,结果显示鱼露发酵过程中细菌数量在3.16×10~4~3.16×10~5个/m L范围内变动,数量远高于真菌数,而且该法测得的细菌和真菌数比平板计数法高1~2个数量级。
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实时荧光定量PCR方法检测转基因玉米MIR604
《浙江农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：转基因玉米MIR604是瑞士先正达公司2005年研发的抗虫玉米,中国于2008年批准MIR604进口作为食品和饲料的加工原料。为了精确定量检测MIR604及其加工产品,在MIR604的左侧边界序列和玉米基因组之间设计引物和探针,成功建立了MIR604品系特异实时荧光定量PCR检测方法。采用该方法设计的引物和探针,对6种非转基因作物、MIR604及其他非目标转基因作物进行检测,除MIR604外,其余样品均未检测到MIR604分子片段的扩增信号;对已知含量为1%的MIR604标准品进行定量检测,测量值为1.07%,接近真实值1%;灵敏度实验结果显示,该方法能检测到仅5个拷贝的MIR604分子片段。该试验所建立的MIR604品系特异实时荧光定量PCR检测方法具有较高的特异性、准确度及灵敏度,可用于转基因玉米MIR604的定量检测。
关键词： 转基因玉米MIR604 实时荧光定量PCR 特异性 准确度 灵敏度
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枇杷EjAO基因的克隆与表达分析
《分子植物育种 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：果实的成熟和衰老是个复杂的生物学过程,一般认为活性氧(ROS)在其中起着重要作用。本研究采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)和RT-PCR相结合的方法,从白肉枇杷成熟期果实中成功克隆到一个编码抗坏血酸氧化酶(AO)的基因,命名为EjAO。该基因全长2 174 bp,包含了长度为1 605 bp的开放阅读框。该阅读框编码的氨基酸数目为534个,所形成的蛋白质预测分子量为59.39 kD。实时荧光定量PCR结果显示EjAO在根和果实中高丰度表达,并且在白肉枇杷成熟期果实中的表达量远远高于红肉枇杷。核苷酸多态性分析显示EjAO基因在红肉枇杷和白肉枇杷共有五处多态性位点,其中T719C和A730C均导致氨基酸发生改变,推测可能对EjAO的酶学活性产生影响。EjAO的克隆和多态性位点的鉴定为阐明枇杷果实成熟与衰老机制及枇杷遗传改良育种提供一定的理论依据。
关键词： 枇杷 抗坏血酸氧化酶 基因克隆 荧光定量PCR 核苷酸多态性
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实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON88017
《江苏农业学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为完善中国转基因生物及产品定量分析标准化技术体系,保障中国生物安全和降低生态风险,本研究建立了转基因玉米MON88017及产品的实时荧光定量PCR分析方法,并用特异性、准确度、灵敏度以及测量不确定度等指标评价了该方法。结果显示该方法分析转基因玉米MON88017特异性很强;29次重复测量含量为1.50%的转基因玉米MON88017样品,平均测量值(1.541%)接近真实值(1.50%),相对偏差为2.70%,测量值的变异系数为0.110 4,回收率为100.00%,测量不确定度为0.096;在97.5%的置信水平下能检测到最低含量为5个拷贝的MON88017分子片段。因此,本研究建立的转基因玉米MON88017实时荧光定量PCR方法具有较高的特异性、准确度和灵敏度,能为中国转基因生物安全监管提供良好的技术支撑。
关键词： 转基因玉米MON88017 实时荧光定量PCR 特异性 灵敏度 精确度 测量不确定度
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草莓轻型黄边病毒检测研究
《西南农业学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：本文对草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)的2种分子检测技术进行了比较研究。结果表明,多重PCR技术以草莓actin为内参基因,完全排除在实验中杂质与操作的影响。Real time PCR技术具有更高的灵敏度和可靠性,可以定量检测出样本中病毒粒子的含量。结果表明,Real time PCR的灵敏度是普通PCR的100倍以上,而多重PCR的检测成本更经济。所以Real time PCR技术将用于引进品种的检疫,而多重PCR技术将用于大规模的脱毒苗的检验。
关键词： 草莓 草莓轻型黄边病毒 多重PCR 荧光定量PCR
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转基因玉米MIR604结构特异片段实时荧光定量检测方法的建立
《江苏农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：根据转基因玉米MIR604外源载体序列,设计引物和探针,并优化反应体系和热循环条件,建立了MIR604结构特异片断实时荧光定量PCR检测方法。采用该方法对6种非转基因作物、MIR604及其他非目标转基因作物进行检测,除MIR604外,其余样品均未检测到MIR604分子片段的扩增信号;对含量为1%的MIR604标准品进行定量检测,测试样品平均含量为1.05%;灵敏度测试结果显示该方法能检测到仅5个拷贝的MIR604分子片段。因此,本研究建立的方法具有较高的特异性、准确度及灵敏度,能为中国转基因生物安全监管提供技术支持。
关键词： 转基因玉米 结构特异性 实时荧光定量PCR 灵敏度 准确度
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甘蓝型油菜开花调控转录因子CONSTANS的表达分析
《中国农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：[目的]研究开花调控转录因子CONSTANS(CO)同源基因在甘蓝型油菜中的表达特征.[方法]以早熟甘蓝型油菜品系D626-6和晚熟甘蓝型油菜品系D125-5为材料,依据甘蓝型油菜CONSTANS同源基因Bn1CON19设计特异性引物扩增CO基因全长编码区,并根据获得的cDNA序列设计实时荧光定量特异性引物,采用SYBR GreenI染料法进行实时荧光定量PCR研究CO基因表达差异.[结果]在整个生育期内,早熟和晚熟甘蓝型油菜品系的CO基因以叶片中的表达量最高,花蕾和茎中表达量次之,且早晚表达量高于中午时分;在不同生育时期内,抽薹期表达量最大,且早熟甘蓝型油菜品系CO基因在叶片和花蕾中的表达明显高于晚熟甘蓝型油菜品系.[结论]CO同源基因在甘蓝型油菜成花过程中以及生育期的长短上发挥着一定的作用.
关键词： 甘蓝型油菜 转录调控因子 CO基因(CONSTANS) 实时荧光定量PCR
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