科研产出
暗紫贝母鲨烯合酶基因的克隆及其组织表达分析
《西南农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】:克隆名贵药材暗紫贝母（Fritillaria unibracteata）鲨烯合酶（Squalene synthase, SQS）基因的全长ORF序列（FuSQS）,并对其进行生物信息学分析和不同组织表达水平分析。【方法】利用PCR方法,克隆得到FuSQS,利用生物信息学方法预测FuSQS蛋白的基本理化性质、保守结构域、二级及三级结构等蛋白特性,利用Clustal W和MEGA 7.0分别进行氨基酸序列对比和系统进化分析,通过Real-time PCR分析FuSQS在暗紫贝母不同组织的表达水平。【结果】FuSQS长度为1230 bp（GenBank登录号MW365404）,编码1条长度为409个氨基酸残基的肽链,相对分子质量为46.84 kDa,等电点（pI）为6.33,含有法尼基焦磷酸结合口袋和Mg2+结合位点等保守结构域。系统进化树表明FuSQS与油棕、宽瓣重楼、水稻、玉米等单子叶植物进化关系较近。Real-time PCR结果显示,FuSQS在不同组织中表达量有显著差异。【结论】FuSQS的克隆、生物信息学分析及其在鳞茎中的高表达特征,这为进一步研究FuSQS在暗紫贝母生物碱生物合成途径的调控机制提供科学依据。
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木霉菌T23胶毒素合成基因的生物信息学分析与克隆
《基因组学与应用生物学 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：胶毒素是生防木霉菌重要的次生代谢产物之一。本研究以生防木霉菌T23为供试材料,旨在通过生物信息学技术及表达分析,挖掘木霉菌T23中胶毒素合成候选基因,探索木霉菌胶毒素合成的分子调控机制,可为新型生物农药的开发及应用提供理论依据。研究表明,木霉菌T23中胶毒素合成候选基因簇全长28 kb,簇内包含了8个基因,分别与烟曲霉胶毒素合成基因簇内的gliP、gliC、gliN、gliK、gliI、gliG、gliF、gliM高度同源。提取培养2 d、3 d、4 d、5 d的木霉菌T23菌丝的RNA,通过半定量RT-PCR技术探索各候选基因在木霉菌T23不同生长时期的表达情况,显示各基因在不同生长时期均有表达,属于组成型表达基因。成功克隆得到木霉菌T23中的gliP-T23基因并完成基因结构分析,该基因全长6 339 bp,由4个外显子和3个内含子组成,为后续的基因功能验证提供基础。
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转录调控因子AtWRKY71的克隆及其序列分析
《种子 》 2018 北大核心
摘要：采用RT-PCR方法,从模式植物拟南芥叶片克隆出转录因子WRKY 71,经过测序及blast同源性分析,结果表明,该序列与GenBank登陆的AtWRKY71序列基本一致,只在起始密码子下游57bp位置由G突变为C,但并不改变氨基酸的编码,说明已经成功克隆转录调控因子AtWRKY71,为后续功能鉴定奠定了基础。
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枇杷EjAO基因的克隆与表达分析
《分子植物育种 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：果实的成熟和衰老是个复杂的生物学过程,一般认为活性氧(ROS)在其中起着重要作用。本研究采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)和RT-PCR相结合的方法,从白肉枇杷成熟期果实中成功克隆到一个编码抗坏血酸氧化酶(AO)的基因,命名为EjAO。该基因全长2 174 bp,包含了长度为1 605 bp的开放阅读框。该阅读框编码的氨基酸数目为534个,所形成的蛋白质预测分子量为59.39 kD。实时荧光定量PCR结果显示EjAO在根和果实中高丰度表达,并且在白肉枇杷成熟期果实中的表达量远远高于红肉枇杷。核苷酸多态性分析显示EjAO基因在红肉枇杷和白肉枇杷共有五处多态性位点,其中T719C和A730C均导致氨基酸发生改变,推测可能对EjAO的酶学活性产生影响。EjAO的克隆和多态性位点的鉴定为阐明枇杷果实成熟与衰老机制及枇杷遗传改良育种提供一定的理论依据。
关键词： 枇杷 抗坏血酸氧化酶 基因克隆 荧光定量PCR 核苷酸多态性
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大蒜叶凝集素基因ASAL的克隆与表达载体的构建
《西南农业学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：大蒜叶凝集素基因(Allium sativum leaf agglutinin,ASAL)是一种高活性的凝集素基因,且具显著的抗虫性。克隆大蒜ASAL基因将为其在转基因作物中抗虫特性研究奠定基础。本文以GenBank公布的ASAL基因序列设计特异引物,采用RT-PCR法从当地大蒜品种二水早和新都软叶的幼苗中克隆ASAL基因。结果表明,克隆的两个ASAL基因与已知基因的碱基序列相似性分别为98.7%和98.9%,氨基酸序列相似性为98.3%。将其亚克隆至表达载体中,经菌落PCR和酶切鉴定,成功构建了重组质粒。将该载体导入农杆菌EHA5a进行保存。
关键词： ASAL基因 刺吸式害虫 基因克隆 表达载体 构建
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柑橘类枯草杆菌蛋白酶基因CcSubtilisin的克隆及遗传转化
《西南大学学报(自然科学版) 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：以克里曼丁橘[Citrus clementina]叶片RNA为材料,采用RT-PCR技术克隆获得了一个编码类枯草杆菌蛋白酶的基因,命名为CcSubtilisin.该基因的开放阅读框(ORF)长度为2 337bp,预测可编码778个氨基酸残基的多肽.分析发现CcSubtilisin与拟南芥、蓖麻、番茄、毛果杨、大豆、挪威云杉、欧洲桤木、百合等18个物种的同源蛋白具有相同的4个保守区域,属于枯草杆菌蛋白酶.通过构建该基因的超表达载体并以沙田柚为材料进行遗传转化,获得了该基因的9个转基因沙田柚株系.实时定量PCR结果表明,4个用于检测的株系中有3株的表达量明显高于对照.
关键词： 丝氨酸蛋白酶 枯草杆菌蛋白酶 基因克隆 序列分析 遗传转化
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桃甜菜碱脱氢酶基因的克隆及表达分析
《西南农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：本研究以泸定香桃和皮球桃为供试材料,利用同源克隆及实时荧光定量PCR,分析桃基因组2个同源甜菜碱醛脱氢酶基因及其在果肉中的表达。结果表明,2基因p Badh1和p Badh2全长分别为4749和3026 bp,都包含1512 bp的CDS序列,编码503个氨基酸,都分别由15个外显子和14个内含子组成;p Badh1和p Badh2序列在泸定香桃和皮球桃中未发现核苷酸变异。2基因在成熟桃果肉中的表达水平不一致,在泸定香桃中的表达量都明显高于在皮球桃中的表达,且p Badh2基因的表达量显著高于p Badh1,由此可推测,p Badh2基因在桃物种中的表达调控功能强于p Badh1基因,为进一步验证2基因功能奠定理论基础。
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甘蓝型油菜甜菜碱醛脱氢酶基因(BnBADH-1)的克隆与真核表达载体的构建
《分子植物育种 》 2013 CSCD
摘要：根据已知的拟南芥甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH1)序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术从甘蓝型油菜中克隆出油菜甜菜碱醛脱氢酶基因(BnBADH-1)全长。测序和分析结果表明,BnBADH-1的cDNA全长1506bp,编码一个包含501个氨基酸残基、分子量为55kD、等电点(pI)为5.16的假定蛋白质;核酸序列和氨基酸序列与拟南芥的同源性分别为90.24%和93.41%。利用片段两端的粘性末端酶切位点BamHⅠ和SacⅠ将cDNA片段连接在真核表达载体pBI121上;PCR鉴定表明,过量表达载体pBI121-BnBADH-1已成功构建,为下一步的基因功能分析做好了准备。
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