科研产出
道地中药材川贝母特异性PCR鉴别方法研究
《中国农学通报 》 2022 CSCD
摘要：为建立快速检测中药材川贝母成分的特异性PCR法,从NCBI数据库下载植物HMGR基因序列,根据同源性区域设计兼并引物,对川贝母及其易混品鳞茎基因组进行扩增.通过比对川贝母特异性DNA片段区域,设计引物扩增获得川贝母基原物种特异核酸片段.从川贝母基原鳞茎中提取DNA,设计特异引物对BMH-TF/BMH-TR,优化PCR扩增条件,通过特异性、灵敏度实验验证,建立特异性PCR检测体系.采用该方法从川贝母基原中扩增出一条120 bp左右条带,而非川贝母样品、空白对照在相同条件下无扩增条带,检测灵敏度为2 ng/μL,检测下限为4 ng.对10个市售药材的检测结果证明,该方法简便可行、重现性好.该PCR法可快速、准确鉴别川贝母基原,具有操作简便、快速、特异性高的优点.
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实时荧光定量PCR方法检测转基因玉米MIR604
《浙江农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：转基因玉米MIR604是瑞士先正达公司2005年研发的抗虫玉米,中国于2008年批准MIR604进口作为食品和饲料的加工原料。为了精确定量检测MIR604及其加工产品,在MIR604的左侧边界序列和玉米基因组之间设计引物和探针,成功建立了MIR604品系特异实时荧光定量PCR检测方法。采用该方法设计的引物和探针,对6种非转基因作物、MIR604及其他非目标转基因作物进行检测,除MIR604外,其余样品均未检测到MIR604分子片段的扩增信号;对已知含量为1%的MIR604标准品进行定量检测,测量值为1.07%,接近真实值1%;灵敏度实验结果显示,该方法能检测到仅5个拷贝的MIR604分子片段。该试验所建立的MIR604品系特异实时荧光定量PCR检测方法具有较高的特异性、准确度及灵敏度,可用于转基因玉米MIR604的定量检测。
关键词： 转基因玉米MIR604 实时荧光定量PCR 特异性 准确度 灵敏度
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第一、二代转cp4-epsps基因大豆鉴定方法的建立
《南方农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立一种广谱性鉴定第一、二代转cp4-epsp基因大豆的检测方法,为准确鉴定第一、二代转cp4-epsps基因大豆及其产品提供技术支持。【方法】根据第一、二代转基因大豆的cp4-epsp基因保守序列设计一对能同时鉴定两代转基因大豆外源基因cp4-epsps的引物和探针,建立一种广谱性鉴定第一、二代转cp4-epsps基因大豆的方法,并从准确性、特异性、灵敏性及重复性4个方面对该方法进行评估。【结果】设计的引物/探针对鉴定第一、二代转cp4-epsps基因大豆及其产品具有广谱性;建立的检测方法能检测到反应体系中低至5×100拷贝的cp4-epsps基因,Ct为38.88,且能同时检测出两代转基因大豆。准确性和特异性评估结果显示仅两代转cp4-epsp基因的大豆能被检测到;40次重复试验结果显示,反应体系中5×100拷贝的cp4-epsps基因片段的检出率为100%。【结论】建立的第一、二代转cp4-epsps基因大豆鉴定方法具有特异强、灵敏度高、重复性好、准确性高等特点,可用于转cp4-epsp基因大豆及其产品的监测。
关键词： 转基因大豆 cp4-epsps基因 广谱性 特异性 灵敏度
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实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON88017
《江苏农业学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为完善中国转基因生物及产品定量分析标准化技术体系,保障中国生物安全和降低生态风险,本研究建立了转基因玉米MON88017及产品的实时荧光定量PCR分析方法,并用特异性、准确度、灵敏度以及测量不确定度等指标评价了该方法。结果显示该方法分析转基因玉米MON88017特异性很强;29次重复测量含量为1.50%的转基因玉米MON88017样品,平均测量值(1.541%)接近真实值(1.50%),相对偏差为2.70%,测量值的变异系数为0.110 4,回收率为100.00%,测量不确定度为0.096;在97.5%的置信水平下能检测到最低含量为5个拷贝的MON88017分子片段。因此,本研究建立的转基因玉米MON88017实时荧光定量PCR方法具有较高的特异性、准确度和灵敏度,能为中国转基因生物安全监管提供良好的技术支撑。
关键词： 转基因玉米MON88017 实时荧光定量PCR 特异性 灵敏度 精确度 测量不确定度
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黄连的特异性、一致性和稳定性测试性状的选择
《华西药学杂志 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：目的对四川主产黄连进行了测试性状的选择与初步分析,为制订黄连特异性、一致性和稳定性(DUS)测试指南提供科学依据。方法选择黄连的48个形态性状,包括12个必测性状和36个补充性状,分析数量性状的差异性;探讨HPLC指纹图谱在黄连DUS测试应用,分析了不同品种的黄连差异性,作为鉴定辅助手段。结果黄连的数量性状受环境与生长年限影响大,许多性状均有较大变异。采用HPLC-FPS曲线图分析不同品种的黄连,差异性都比较明显。结论制订测试指南时应以植物形态特征为主,品质性状和生理生化性状为辅。如果形态性状难以区分,可将化学成分指纹图谱技术作为辅助鉴定手段。
关键词： 黄连 特异性 一致性 稳定性 差异性分析 HPLC指纹图谱
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