科研产出
转基因玉米ND207转化事件特异性定性PCR检测方法及其标准化
《作物学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：转基因玉米ND207是中国农业大学研发的转mCry1Ab和mCry2Ab基因的抗虫玉米,本研究的目的是建立ND207转化事件特异性定性PCR检测方法。根据研发者提供的引物进行PCR扩增,PCR产物测序分析,获得了5’端旁侧序列262 bp,包括109 bp的载体序列和153 bp的玉米基因组序列, 3’端旁侧序列316 bp,包括76 bp的载体序列和240bp的玉米基因组序列。针对两端旁侧序列设计14条引物,组成25对引物组合进行引物筛选,选中3’端一对最佳引物优化PCR反应体系及反应条件,建立ND207的转化事件特异性定性PCR检测方法, PCR产物片段大小为166 bp。经过测试,该方法的检出限为0.1%,相当于20个拷贝的ND207特异分子片段。国内8家转基因生物安全检测机构对本方法进行了特异性测试、检出限测试和再现性测试,循环验证报告显示:该方法符合国家标准方法的各项要求,可在检测行业推广应用。ND207转化事件特异性定性PCR检测方法的建立,为我国ND207及其衍生品系的安全监管提供技术支撑。
关键词： 转基因玉米 ND207 旁侧序列 转化事件特异性 定性PCR
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用蒙特卡洛方法评定转基因玉米59122的测量不确定度
《江苏农业科学 》 2018 北大核心
摘要：为明确转基因成分测量不确定度的主要成分及其贡献大小,提高转基因成分定量检测质量和维护我国农产品国际贸易利益,首次采用蒙特卡洛法评定混合样品中转基因玉米59122的测量不确定度。结果表明,转基因玉米59122的相对含量为0.57%,不确定度极小(1.82×10~(-4))。在95%的包含概率下转基因玉米59122的相对含量检测值落在较窄的包含区间0.54%~0.61%范围内,揭示出检测质量较高、数据可靠;混合样品中转基因玉米59122相对含量的概率密度分布呈正态分布,与用GUM法评定测量不确定的假设条件"输出量概率密度函数为正态分布"一致,显示转基因成分测量不确定度评定也可以采用GUM法;不确定度贡献最大的是液体转移量的偏差,因此,提高液体转移的准确度是提高转基因成分检测质量的关键。
关键词： 转基因玉米 59122片段 概率分布传播 不确定度
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采用蒙特卡洛法评定转基因玉米DAS-4-40278-9的测量不确定度
《浙江农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：不确定度传播律(GUM法)是分析测量领域里常用的测量不确定度评定方法,但该法存在输出量为正态分布假设等诸多局限。为了在转基因成分检测试验中提供一种更优和更适合的测量不确定度评定方法,采用蒙特卡洛法(MCM)评定混合样品中转基因玉米DAS-4-40278-9的测量不确定度。结果表明,转基因玉米DAS-4-40278-9的相对含量平均值为1%,不确定非常小(3.07×10~(-4))。在95%的包含概率下,转基因玉米DAS-4-40278-9的相对含量检测值落在较窄的包含区间0.94%~1.06%。结果显示,混合样品中转基因玉米DAS-4-40278-9的相对含量的概率密度分布呈正态分布,与用GUM法关于"输出量概率密度函数为正态分布"的假设一致。由于MCM法可避免传统GUM法的局限性,建议在开展转基因成分测量不确定度评定时可采用MCM法。
关键词： 转基因玉米 DAS-4-40278-9 概率分布传播 不确定度
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抗草甘膦转基因玉米外源基因ddPCR拷贝数分析
《西南农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】本研究是从前期获得的100余份转基因抗除草剂草甘膦玉米品系中,挑选T抗-1等14个转基因玉米品系进行拷贝数检测。【方法】采用一种新型的拷贝数分析方法——微滴数字PCR技术(droplet digital PCR,简称dd PCR),设计特异引物对外源抗草甘膦基因2m G2-epsps进行绝对定量分析。【结果】供试的14份转基因材料中10份是单拷贝品系。同时,通过引物探针特异性试验、叶片基因组DNA的PCR抑制和浓度检测、转基因玉米的外源基因2m G2-epsps的实时PCR检测和基因组DNA的酶切等系列研究,建立稳定的转基因玉米拷贝数分析的dd PCR检测体系。【结论】微滴数字PCR技术为这批转基因玉米的下一步转基因生物安全评价提供了重要参数,同时建立了转基因玉米(genetically modified maize)外源基因拷贝数dd PCR分析方法。
关键词： 转基因玉米 草甘膦抗性 外源基因 拷贝数 微滴数字PCR(dd PCR)
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多重PCR筛查检测进口转基因玉米
《核农学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为获得进口转基因玉米筛查检测策略,并根据策略建立多重PCR方法,对15个进口转基因玉米分子特征进行分析。结果表明,将P-Ca MV 35S、T-NOS等2个基因组合作为检测策略可全部检出15个进口转基因玉米至少1次;将P-Ca MV 35S、P-ract1、T-NOS、bar、pat、PMI等6个基因组合作为检测策略,除MON810检出1次外,其他每个转化体可检出至少2次。同时,利用获得的筛查检测策略建立多重PCR体系,对2个基因组合的策略优化,结果表明适宜退火温度为58℃,适宜引物终浓度(μmol·L-1)配比为0.2∶0.2;对6个基因组合的策略优化,结果表明适宜退火温度为60℃,引物终浓度配比为0.2∶0.1∶0.1∶0.1∶0.1∶0.05。采用已知样品对多重PCR体系进行验证,图谱显示与转化体分子特征完全一致。该研究结果将为进口转基因玉米筛查检测提供参考。
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转G2-EPSPS基因玉米D-3侧翼序列分析与转化体特异性检测方法
《作物杂志 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：通过一次3'端高效热不对称交互PCR(hiTAIL-PCR)和一次长链PCR扩增方法获得了转抗草甘膦基因(G2-EPSPS)玉米品系D-3的外源DNA插入片段的全DNA序列(T-DNA)及两端侧翼序列,并建立了转化体特异性PCR检测方法。结果显示:T-DNA插入片段全长4 318bp,由一个G2-EPSPS基因的表达盒构成。根据T-DNA 5'、3'端侧翼序列设计引物,建立了转化体特异性检测方法,并分析了该方法的灵敏度以及检出限,研究结果表明,3'端定性PCR检测方法特异性强,灵敏度高,检出极限为每100ng模板量的0.05%。本研究结果对转抗草甘膦外源基因检测和生物安全评价及监管具有重要意义。
转基因玉米MIR604结构特异片段实时荧光定量检测方法的建立
《江苏农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：根据转基因玉米MIR604外源载体序列,设计引物和探针,并优化反应体系和热循环条件,建立了MIR604结构特异片断实时荧光定量PCR检测方法。采用该方法对6种非转基因作物、MIR604及其他非目标转基因作物进行检测,除MIR604外,其余样品均未检测到MIR604分子片段的扩增信号;对含量为1%的MIR604标准品进行定量检测,测试样品平均含量为1.05%;灵敏度测试结果显示该方法能检测到仅5个拷贝的MIR604分子片段。因此,本研究建立的方法具有较高的特异性、准确度及灵敏度,能为中国转基因生物安全监管提供技术支持。
关键词： 转基因玉米 结构特异性 实时荧光定量PCR 灵敏度 准确度
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转基因玉米种子萌发期抗旱性鉴定
《干旱地区农业研究 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：采用聚乙二醇(PEG)高渗溶液,对13个转基因玉米自交系进行了种子萌发期模拟水分胁迫发芽试验,研究了渗透胁迫模拟干旱对抗旱转基因玉米种子萌发状况的影响。结果表明:干旱胁迫对玉米发芽势、发芽率、根数、胚根长、胚芽长、贮藏物质转化率等均有不同程度的影响,不同转基因玉米自交系在抗旱性上存在明显差异。同时,使用隶属函数法对参试转基因玉米自交系的种子萌发抗旱性进行了分析评价,其中SD10为萌发期抗旱性较强的自交系;CBF-3-4、SD13、SD05、CBF-1-4、CBF-6-5、SD-P3、SD-P5为萌发期抗旱性中等的自交系;SD06、CBF-3-1、SD07、SD-P1、SD-P4为萌发期抗旱性较弱的自交系。种子萌发抗旱指数与隶属函数对玉米自交系抗旱性分析结果比较一致。
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实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON863的测量不确定度分析
《玉米科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：应用四川省农业科学院分析测试中心实验室建立的转基因玉米MON863品系特异实时定量PCR方法,测定含量为1%的转基因玉米MON863样品(CRM)中旁侧片段(品系特异片段)的含量,并从扩增反应、数据处理以及微量移液器等不确定度来源评定测量的不确定度。结果表明,uA=1.9×10-2,uB=9.3×10-4,uC=1.9×10-2,U95=0.04,测量结果为1.108%±0.04。MON863品系特异实时定量PCR方法检测结果的主要不确定度来自检验过程中的随机效应。
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