科研产出
多重PCR检测抗除草剂油菜RT73
《山西农业科学 》 2017
摘要：为了建立一种抗除草剂油菜RT73多重PCR检测方法,试验对抗除草剂油菜RT73分子特征信息进行分析,将外源插入基因P-FMV 35S,T-E9 3′,CP4-EPSPS,GOX和油菜内源参照基因CruA等5个基因作为多重PCR检测参数,通过对多重PCR体系中引物退火温度和引物浓度配比的优化。结果显示,获得的多重PCR适宜的引物终浓度(μmol/L)配比GOX∶CruA∶P-FMV 35S∶CP4-EPSPS∶T-E9 3′为0.1∶0.1∶0.1∶0.1∶0.1以及适宜的引物退火温度为58℃;采用优化后的反应体系对多重PCR体系灵敏度进行测试,结果显示,方法灵敏度为200个拷贝;最后利用建立的多重PCR方法对已知样品进行检测,结果表明,试验建立的多重PCR体系具有良好的可靠性。
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利用多重PCR技术同时检测6种棉花转化体的方法研究
《棉花学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立1种转基因棉花多重聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测方法。【方法】试验选择6种转基因棉花作为多重PCR检测对象,通过引物终浓度配比和引物退火温度的两要素全组合优化多重PCR反应体系,并分析方法灵敏度。【结果】多重PCR较优的MON1445、GHB614、MON15985、MON88913、LLCOTTON25、MON531引物终浓度为0.25、0.30、0.25、0.16、0.30、0.20μmol·L-1,较优引物退火温度为56℃,方法灵敏度为66个拷贝棉花基因组。利用盲样对上述体系的验证结果显示,所有盲样扩增条带与其含有的转基因转化体完全一致。【结论】本研究建立的体系可用于6种棉花转化体的快速检测。
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一种可同步检测3种外源基因的多重PCR方法
《山西农业科学 》 2017
摘要：为建立一种可同步检测3种外源基因的多重PCR方法,试验选择较常见的T-CaMV 35S,P-CaMV 35S和pat这3个基因作为多重PCR检测对象,对多重PCR体系中引物浓度配比和引物退火温度进行优化。结果表明,多重PCR适宜的引物终浓度(μmol/L)配比T-CaMV 35S∶P-CaMV 35S∶pat为0.2∶0.2∶0.2以及适宜的引物退火温度为56℃;采用优化后的反应体系对多重PCR体系灵敏度进行测试,结果显示,方法灵敏度为0.5 ng;通过利用建立的多重PCR方法对已知样品进行检测,结果表明,试验建立的多重PCR体系具有良好的可靠性。
关键词： T-CaMV 35S P-CaMV 35S pat 多重PCR 检测
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多重PCR筛查检测进口转基因玉米
《核农学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为获得进口转基因玉米筛查检测策略,并根据策略建立多重PCR方法,对15个进口转基因玉米分子特征进行分析。结果表明,将P-Ca MV 35S、T-NOS等2个基因组合作为检测策略可全部检出15个进口转基因玉米至少1次;将P-Ca MV 35S、P-ract1、T-NOS、bar、pat、PMI等6个基因组合作为检测策略,除MON810检出1次外,其他每个转化体可检出至少2次。同时,利用获得的筛查检测策略建立多重PCR体系,对2个基因组合的策略优化,结果表明适宜退火温度为58℃,适宜引物终浓度(μmol·L-1)配比为0.2∶0.2;对6个基因组合的策略优化,结果表明适宜退火温度为60℃,引物终浓度配比为0.2∶0.1∶0.1∶0.1∶0.1∶0.05。采用已知样品对多重PCR体系进行验证,图谱显示与转化体分子特征完全一致。该研究结果将为进口转基因玉米筛查检测提供参考。
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抗除草剂棉花LLCOTTON25的多重PCR检测方法
《棉花学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为了建立1种抗除草剂棉花LLCOTTON25多重PCR检测方法,根据抗除草剂棉花LLCOTTON25分子特征,同时选择棉花内源参照基因(SADI)、花椰菜花叶病毒启动子(P-Ca MV 35S)、根癌农杆菌终止子(T-NOS)和目的基因(bar)4个基因作为多重PCR(Polymerase chain reaction)检测基因,参照国家相关标准中的特异性引物序列,通过对反应条件的优化以及方法特异性和灵敏度测试,建立了可同时检测除内源基因外的3种外源目的基因的多重PCR检测体系。利用已知样品对本体系验证,抗除草剂棉花LLCOTTON25能被同时检出SADI、P-Ca MV 35S、T-NOS、bar等4个基因,而其他样品均不能被同时检出这4个基因。结果表明此体系可运用于抗除草剂棉花LLCOTTON25检测。
关键词： 棉花 LLCOTTON25 多重PCR 检测 CaMV 35S T-NOS
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多重PCR检测抗草甘膦大豆GTS40-3-
《大豆科学 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：将大豆内源参照基因(Lectin)、外源基因P-CaMV 35S、CP4-EPSPS和T-NOS作为多重PCR检测参数,建立了一种多重PCR检测抗草甘膦大豆GTS40-3-2的方法。反应条件优化结果表明:多重PCR的适宜退火温度为58℃,适宜引物终浓度(μmol·L~(-1))配比为:0.1∶0.2∶0.2∶0.2。采用已知样品对多重PCR体系进行验证,检测结果可靠,证明该多重PCR体系为一种有效的抗草甘膦大豆GTS40-3-2的检测方法。
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耐除草剂甜菜H7-1多重PCR检测方法的建立
《山西农业科学 》 2016
摘要：依据耐除草剂甜菜H7-1分子特征,同时选择甜菜内源参照基因(Glu A)、外源基因P-FMV 35S,CP4-EPSPS和T-E9 3'等4个基因作为多重PCR检测参数,基因特异性引物序列参照相关国家标准,通过对反应条件的优化以及方法特异性和灵敏度测试,建立了多重PCR检测体系。利用已知样品对该体系验证,耐除草剂甜菜H7-1能被同时检出Glu A,P-FMV 35S,CP4-EPSPS和T-E9 3'等4个基因,而其他样品均不能被同时检出这4个基因,结果表明,此体系可运用于耐除草剂甜菜H7-1检测。
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草莓轻型黄边病毒检测研究
《西南农业学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：本文对草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)的2种分子检测技术进行了比较研究。结果表明,多重PCR技术以草莓actin为内参基因,完全排除在实验中杂质与操作的影响。Real time PCR技术具有更高的灵敏度和可靠性,可以定量检测出样本中病毒粒子的含量。结果表明,Real time PCR的灵敏度是普通PCR的100倍以上,而多重PCR的检测成本更经济。所以Real time PCR技术将用于引进品种的检疫,而多重PCR技术将用于大规模的脱毒苗的检验。
关键词： 草莓 草莓轻型黄边病毒 多重PCR 荧光定量PCR
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四重PCR检测抗除草剂转基因油菜T45
《南方农业学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立多重PCR检测抗除草剂转基因油菜T45的方法,为其转基因检测提供技术支持。【方法】选择油菜内源参照基因Cru A、外源基因P-Ca MV 35S、T-Ca MV 35S和pat作为四重PCR检测基因,特异性引物序列参照国家相关标准或文献,通过对多重PCR退火温度和引物浓度的优化、灵敏度测试及已知样品验证,建立抗除草剂转基因油菜T45多重PCR检测体系。【结果】多重PCR的适宜退火温度为58℃,适宜引物终浓度(μmol/L)配比Cru A∶P-Ca MV35S∶T-Ca MV 35S∶pat为0.1∶0.2∶0.2∶0.2,方法灵敏度为0.01 ng/μL,所有已知样品的扩增条带与其分子特征显示的外源基因元件完全一致。【结论】建立的抗除草剂转基因油菜T45品系四重PCR检测方法可实现在一个反应体系中同时检测抗除草剂转基因油菜T45内源参照基因和多个外源基因成分,为转基因油菜T45提供了一种有效的检测手段。
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