科研产出
花生茎源茉莉炭疽菌的分离鉴定及生物学特性研究
《畜牧兽医学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：旨在探究首次从花生茎中分离出茉莉炭疽菌（Colletotrichum jasminigenum）的生物学特性。通过三点接种法，经马铃薯葡萄糖琼脂（potato dextrose agar, PDA）培养基分离培养，分别用乳酸酚棉蓝染色和扫描电镜观察其形态，提取分离真菌DNA,用PCR方法扩增ITS区并测序，比对该基因同源性及遗传进化关系。将孢子悬液以5×10~7 CFU·mL-1剂量感染昆明小鼠，并观察小鼠的临床症状、血清生化指标和剖检病变。用K-B纸片法探究其耐药表型。结果显示，分离株分生孢子长29.6μm±0.87μm,呈月牙形；菌丝透明无性，有隔和分枝，无刚毛；附着孢呈棍棒状或者卵球形。PCR扩增得到该菌ITS区序列长度为586 bp,序列提交GenBank（OR472966）。根据形态学结合ITS区序列分析结果确定分离株为茉莉炭疽菌，命名为SLY01。用SLY01菌株攻毒小鼠14 d后导致血清碱性磷酸酶含量极显著升高（P＜0.01）,肝脏器指数显著下降（P＜0.05）,并从感染小鼠体内再次分离鉴定出茉莉炭疽菌。组织病理学结果显示，试验组小鼠肺泡壁水肿伴有大量淋巴细胞浸润；肝细胞出现大面积颗粒变性，肝小叶内见出血和肝细胞坏死；肾可见肾小管上皮发生颗粒变性。药敏试验显示，SLY01菌株对卡泊芬净和伏立康唑耐药，对两性霉素B敏感，对伊曲康唑中度敏感。本研究分离鉴定得到茉莉炭疽菌，感染小鼠主要损伤靶器官为肝、肺，并且对多种药物耐药。这为进一步研究茉莉炭疽菌的防治提供理论依据。
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猪链球菌3型的分离鉴定及耐药性分析
《黑龙江畜牧兽医 》 2024 北大核心
摘要：为查明四川地区某规模化猪场猪发病死亡原因并进行有效防控，试验采集病死猪肺脏组织样本4份进行细菌的分离，并对分离菌株进行菌落形态观察、革兰氏染色和镜检、猪链球菌的PCR鉴定、血清型鉴定、主要毒力基因检测、药敏试验和耐药基因检测。结果表明：从病料中共分离到4株菌，4株分离菌株在胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)中均呈灰白色、针尖状、圆形的菌落，革兰氏染色后镜检可见呈蓝紫色、圆形或卵圆形、链状排列的革兰氏阳性菌，符合猪链球菌的形态特征，分别命名为SYS9、SYS14、SYS15和SYS16。经猪链球菌的PCR鉴定和血清型鉴定确定4株分离菌株均为猪链球菌3型。4株猪链球菌分为2种毒力基因型，SYS9株的毒力基因型为mrp+epf+sly+fbps+cps-orf2+,SYS14、SYS15和SYS16的毒力基因型为mrp+epf+sly+fbps+cps+orf2+;4株猪链球菌均对四环素和泰乐菌素耐药，且均对阿莫西林(青霉素类药物),氟苯尼考和氯霉素(酰胺醇类药物),利奈唑胺(口恶唑烷酮类药物),头孢匹罗、头孢氨苄和头孢拉定(头孢菌素类药物),环丙沙星和左氟沙星(喹诺酮类药物)敏感。除SYS9株仅对四环素和泰乐菌素耐药外，其余3株菌均为3重或3重以上耐药菌株，其中SYS15株为6重耐药菌株。4株猪链球菌均未检出耐药基因ermA、mefA、msrD、fexA、fexB、aph(3′)-Ⅲa、ant(6′)-Ⅰa、aph(2′)-Ⅰb; SYS9株检出耐药基因tetO和ermB,SYS14株检出耐药基因tetM、tetO、ermB、aac(6′)-aph(2″)和optrA,SYS15株检出耐药基因tetM、tetO、tetL、ermB、aac(6′)-aph(2″)和optrA,SYS16株检出耐药基因tetM、tetO、tetL、ermB、aac(6′)-aph(2″)、optrA和Lsa(E)。说明该规模化猪场猪发病死亡原因为猪链球菌3型感染，可使用青霉素类、酰胺醇类、口恶唑烷酮类、头孢菌素类、喹诺酮类药物进行治疗。
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猪流行性腹泻病毒CH/SCJY/2022株的分离鉴定及遗传进化分析
《黑龙江畜牧兽医 》 2024 北大核心
摘要：2022年四川省简阳地区某规模化猪场仔猪发生严重腹泻甚至死亡，疑似猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）感染。为确定病原并了解其遗传进化特征，试验无菌采集病死腹泻仔猪小肠组织样本，提取RNA后采用RT-PCR方法对病原进行检测，并对病毒进行分离和半数组织培养感染剂量(TCID50)测定、间接免疫荧光试验、全基因组测序和遗传进化分析。结果表明：腹泻仔猪小肠组织样本为PEDV阳性，小肠组织过滤上清液接种Vero细胞盲传至第3代出现致细胞病变效应（cytopathic effect, CPE）,盲传至第9代时出现稳定的CPE,第9代病毒液的TCID50为1×10-5.2/0.1 mL;在以鼠源抗PEDV-S蛋白单克隆抗体为一抗、FITC标记的羊抗鼠IgG为二抗的间接免疫荧光试验中，接种分离毒株的Vero细胞呈现特异性绿色荧光，未接种分离毒株的Vero细胞无特异性绿色荧光。将分离毒株命名为CH/SCJY/2022。经PCR分段扩增、测序、拼接后得到CH/SCJY/2022株全基因组序列，大小为28 038 bp。CH/SCJY/2022株S基因、ORF3基因、M基因、N基因与参考毒株（CV777、AJ1102、LW/L、virulent DR13、LZC）核苷酸相似性分别为93.11%～97.71%、95.41%～98.37%、96.62%～98.09%、94.72%～96.38%。CH/SCJY/2022株全基因组序列与30株PEDV参考毒株核苷酸相似性为96.0%～98.9%,其中与强毒变异株YC2014的相似性最高（98.9%）,与韩国毒株SM98的相似性最低（96.0%）,与疫苗毒株CV777、AJ1102的相似性分别为96.4%和98.3%。基于全基因组序列构建的遗传进化树中可见CH/SCJY/2022株与CH/SCZY103/2017位于同一小分支，亲缘关系最近，属于GⅡb基因亚群；与疫苗毒株LW/L、AJ1102、XJ-DB2、CV777、attenuated DR13的亲缘关系较远。与参考毒株（attenuated DR13、LW/L、CV777、AJ1102、XJ-DB2）相比，CH/SCJY/2022株S蛋白氨基酸序列存在6处特有的氨基酸位点突变，分别为N139D、I289M、R492K、F541L、L1000M、S1080L。说明试验成功从该养猪场腹泻仔猪小肠组织样本中分离鉴定到1株PEDV GⅡb亚群变异株，并获得了该毒株的全基因组序列，具有独特的分子特征。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 全基因组测序 同源性分析 遗传进化分析 分离 鉴定
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基于CO Ⅰ基因的酸模角胫叶甲DNA条形码研究
《中国植保导刊 》 2023 北大核心
摘要：经调查,一种叶甲在四川省阿坝藏族羌族自治州药用植物唐古特大黄上大量发生为害,严重影响当地大黄产业.从受害株上采集卵、幼虫、成虫样品,进行形态学鉴定,并对样品的线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因进行PCR扩增和测序,获得该虫不同发育阶段的COⅠ基因序列,与数据库中酸模角胫叶甲(Gastrophysa atrocyanea)COⅠ基因比较,相似性达98.54%~99.81%,再利用K2P模型构建NJ系统进化树,确定遗传关系.结果显示,这种为害唐古特大黄的叶甲即酸模角胫叶甲.本研究使用的基于CO Ⅰ基因的DNA条形码技术可实现对该虫不同发育阶段(卵、幼虫、成虫)快速而准确的鉴定,从而为及时开展防治提供依据.
关键词： 酸模角胫叶甲 唐古特大黄 DNA条形码 鉴定 CO Ⅰ
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基于SSR标记检测与重测序技术的3个李品种鉴定与遗传背景简析
《中国南方果树 》 2023 北大核心
摘要：“玉带李”“青脆李”“蜂糖李”是熟期或外观相近的四川省主栽青皮李品种。为探索快速区分这3个青皮李品种的方法，对其果实成熟期与外观特征进行比较，采用前人公布的李属种质资源77对SSR标记进行分型，并使用基因组重测序技术简析其遗传背景。结果表明，29号引物和UDP98-021可以作为区分“蜂糖李”的分子标记，ASS R71可以作为区分“青脆李”的分子标记，再结合“玉带李”果实成熟期更晚和具水渍带状缝合线的特点，可以成功区分出这3个李品种。基于重测序技术的SNP、InDel变异检测及可视化分析结果表明，“玉带李”与其他两个品种的遗传背景差异较大，“青脆李”“蜂糖李”遗传背景高度相似。“玉带李”可以作为“青脆李”“蜂糖李”的配套授粉品种，是李品种改良的优良亲本。
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四川大白菜细菌性软腐病新病原菌Pectobacterium versatile的鉴定
《植物保护 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为明确引起四川理县大白菜软腐病的病原菌种类,从理县梭罗沟村田间采集具有典型软腐症状的大白菜病样,采用组织分离、致病力测定、生理生化分析、形态学和分子生物学方法进行鉴定.结果表明,分离获得的5株细菌在NA培养基上形成的菌落呈圆形、半透明、乳白色、中心突起、边缘平滑,在半选择性培养基CVP上培养48 h后产生凹陷.5株菌均能使大白菜、胡萝卜、马铃薯和芹菜的离体组织腐烂,接种于白菜苗后叶片呈湿腐萎蔫症状.通过大白菜叶柄接种部位形成的病斑长径来比较菌株致病力强弱,各菌株的致病力有显著差异.基于看家基因pgi、rpoS、mdh、proA、mtlD和icdA(NCBI登录号为OL963562~OL963571)的多基因联合系统发育树,分离菌株与 Pectobacterium versatile 聚为一簇,dnaX-leuS-recA(NCBI登录号为 OL963572~OL963576)的多位点序列分析(MLSA)进一步支持以上结果,且准确性更高.分离菌株的生理生化特征与P.versatile模式菌株一致,综上将其鉴定为P.versatile.这是我国首次报道P.versatile引起大白菜软腐病.
关键词： Pectobacterium versatile 软腐病 病原鉴定 多位点序列分析
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西藏土壤芽孢杆菌的分离鉴定及生防促生菌筛选
《江苏农业科学 》 2023 北大核心
摘要：青稞是西藏人民的主要粮食作物，在种植生长过程中有多种病害对其产生危害，直接影响青稞的产量和质量。本研究针对如何绿色防治西藏青稞网斑病立题，以期找到对某一种或几种青稞病害高效的生防菌株，为青稞网斑病防治及生产实际提供材料。采集林芝市鲁朗镇扎西岗村的青稞网斑病植株活体样本，采用组织分离法和离体培养法获得青稞网斑菌菌株XZQKWB。从西藏自治区不同采样点采集根际土壤，采用温度筛选法和平板涂布法分离得到11 718株芽孢杆菌。以分离得到的芽孢杆菌为材料，以6种病原菌为靶标，共筛选得到14株对6种病原菌均具有不同程度的抑制效果的芽孢杆菌：91-5、92-1、92-10、92-3、27-36、32-69、94-19、44-36、5-142、58-59、58-7、59-60、63-35和66-53。结合形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列分析，初步鉴定58-7、59-60、27-36、63-35、44-36、58-59和66-53为阿氏芽孢杆菌（Priestia aryabhattai）;菌株94-19和32-69为沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis）;菌株92-10和92-3为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）;菌株91-5为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）;菌株92-1和5-142为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对14株菌进行生防盆栽和促生盆栽试验，结果表明菌株92-10兼具溶无机磷能力、解钾能力、固氮能力等促生特性，对藏青2000种子的根长、芽长、株高、地上部鲜质量都有明显的促生效果，在平皿对峙试验中对6个病原菌的抑制率均达到50%以上，在青稞网斑病的盆栽防治试验中防效达到76.5%。
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杂交稻组合节水抗旱性鉴定评价综合指标构建
《农学学报 》 2023
摘要：为了简化杂交稻组合节水抗旱性的综合评价技术体系从而便于育种应用，以6个杂交稻组合进行梯度量化控水试验，通过观察记载和常规考种获得了产量等相关农艺性状数据。利用产量及其结构性状、播抽天数和收获指数等5个初级性状指标，在基于各性状抗旱指数作图和面积算法的基础上，构建了5个多梯度多性状复合抗旱指标：产量及其结构指标（Y-PFK）、产量与抽穗延迟效应指标（Y-HDD）、产量与收获指数指标（Y-HI）、节水抗旱性综合指标1（CI1）和综合指标2（CI2），对各试验组合的5个指标进行计算和作图分析，结果表明指标CI1、CI2、Y-PFK对试验组合的节水抗旱性综合评价效果好，且与田间实际经验观察结果一致；对6个试验组合的节水抗旱性综合评价排序为：‘旱两优8号’>（‘雅优旱禾’>‘旱优737’）>（‘旱优73’>‘荃优116’>‘荃9优86’）。研究结果证明，本研究构建的多梯度多性状复合抗旱指标Y-PFK、CI1、CI2适用于水稻节水抗旱性的综合评价，是利用常规考种数据对杂交稻组合节水抗旱性综合评价和排序的简化指标，可以在节水抗旱稻育种上进行应用。
关键词： 杂交稻 节水抗旱性 鉴定评价 复合指标 节水抗旱稻
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黑青稞麸皮的功能因子结构解析及其抗氧化功能研究
《食品科技 》 2023 北大核心
摘要：以黑青稞麸皮为原料，通过乙醇回流法提取黑青稞麸皮，再依次用大孔吸附树脂、高效液相色谱分离纯化得到活性物质，通过核磁共振分析推测其结构，并测定其体外抗氧化活性。从黑青稞麸皮分离纯化得到2个活性物质，经核磁共振分析和理化性质测定，最终鉴定为柯伊利素-7-O-葡萄糖醛酸、柯伊利素；体外抗氧化试验表明，柯伊利素-7-O-葡萄糖醛酸、柯伊利素DPPH自由基清除能力的IC_(50)为1.44、2.07 mg/mL,ABTS自由基清除能力的IC_(50)为0.59、0.62mg/mL，并且均具有一定的总还原能力。文章首次从黑青稞麸皮中分离纯化出2个活性物质，明确为柯伊利素-7-O-葡萄糖醛酸、柯伊利素，且均具有良好的抗氧化能力。该结果为黑青稞麸皮中活性物质作为天然抗氧化剂的开发利用提供了理论依据。
关键词： 黑青稞麸皮 柯伊利素-7-O-葡萄糖醛酸 柯伊利素 分离纯化 结构鉴定 体外抗氧化活性
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