科研产出
黄连种子内生细菌的分离鉴定及功能验证
《天然产物研究与开发 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：植物种子具有丰富的微生物资源，为深入挖掘黄连种子促生内生菌，本研究通过平板分离获得种子可培养内生菌，对获得的菌株进行溶磷、固氮、产铁载体和产IAA功能研究，筛选具有促生特性的菌株，结合种子萌发实验进行菌株促生功能验证，并对其进行分子生物学鉴定。结果表明，黄连种子可培养内生菌丰富，共分离得到内生菌57株，经16S rRNA鉴定出内生细菌29株，主要分布于芽孢杆菌属Bacillus、寡养假单孢杆菌属Stenotrophomonas、微杆菌属Microbacterium、无色杆菌属Achromobacter等13个属。优势菌为芽孢杆菌属（7株）和寡养假单孢杆菌属（7株）,分别占总鉴定菌株的24.14%。促生特性研究表明，具有溶磷功能菌株2株，固氮功能菌株9株产铁载体菌株2株，产IAA菌株6株，其IAA分泌量为64.52～203.57 mg/L。其中既具有溶磷功能又产IAA菌株1株，既溶磷又产铁载体菌株1株，既产铁载体又产IAA菌株1株。Priestia megaterium和A.spanius可显著提高黄连种子的发芽率。本研究将为揭示种子内生菌的促生机制和顽拗性种子后熟与萌发机制提供理论依据，同时也为微生物菌肥的开发奠定基础。
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附子白绢病拮抗细菌CZ1的分离鉴定、发酵条件优化及防效测定
《微生物学通报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【背景】附子白绢病是齐整小核菌（Sclerotiumrolfsii）引起的土传病害，给附子生产带来了巨大损失。【目的】明确对齐整小核菌具有较好拮抗作用的菌株CZ1的分类地位、优化发酵条件及对附子白绢病的防治效果。【方法】采用稀释涂布的方法从叉角厉蝽马氏管内分离细菌，平板对峙法筛选对齐整小核菌有较强拮抗力的菌株，且测定该菌株对其他植物病原真菌的抑制作用；通过形态特征、生理生化特征以及16S rRNA基因序列等方法明确该菌株的分类地位；以细菌发酵液在波长600 nm时的OD值为指标，并以单因素试验和正交试验的方法进行培养基组分及发酵条件优化；通过室内盆栽试验明确防治效果。【结果】分离获得6株细菌，其中菌株CZ1对齐整小核菌的平板对峙抑制率最高，菌株CZ1对烟草疫霉（Phytophthora nicotiana）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）等均有抑制效果。菌株CZ1被初步鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）。其最佳培养基配方为：蔗糖15.00 g/L，蛋白胨25.00 g/L，酵母浸粉7.50 g/L；最佳培养条件：接种量2%，装液量90 mL，转速为210 r/min，温度36℃，初始pH 8.0、培养时间120 h。室内盆栽试验结果表明，菌株CZ1对附子白绢病的平均防效可以达到59.26%。【结论】菌株CZ1在附子白绢病的防治上具有较好生防潜力。
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附子白绢病拮抗细菌的分离鉴定及发酵条件优化
《南方农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】从黄粉甲中分离获得对附子白绢病病原菌具有较好抑制作用的拮抗细菌，为附子白绢病的生物防治提供菌种资源。【方法】以罹病黄粉甲为材料，通过稀释涂布法和平板对峙法分离并筛选对附子白绢病菌具有拮抗作用的细菌，通过形态结构、生理生化特征及16S r DNA序列分析等对拮抗细菌进行种类鉴定；以拮抗细菌发酵液在600 nm波长下的OD值为指标，采用单因素试验的方法对拮抗细菌的培养基组分以及发酵条件进行优化；通过室内盆栽试验明确拮抗细菌对附子白绢病的防治效果。【结果】采用稀释涂布法从罹病黄粉甲中分离获得4株细菌，经平板对峙法筛选获得对附子白绢病菌具有较好拮抗效果的菌株TS1，该菌对齐整小核菌菌丝生长的抑制率可达68.03%。根据菌株TS1的菌落形态结构、生理生化特征及16S r DNA序列分析结果，确定菌株TS1为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。菌株TS1的优化培养基配方：蛋白胨10.0 g/L、酵母浸粉5.0 g/L、麦芽糖15.0 g/L；最佳发酵条件：装液量30mL、初始接种量0.50%、转速210 r/min、培养温度42℃、初始pH 9、培养时间48 h。室内盆栽保护和治疗试验结果表明，菌株TS1对附子白绢病的平均防治效果分别为49.39%和62.97%。【结论】优化的发酵方案可用于快速、大批量培养菌株TS1菌悬液。菌株TS1对附子白绢病有较好的防治效果，具有开发成附子白绢病生防菌的潜力。
关键词： 黄粉甲 内生细菌 枯草芽孢杆菌 齐整小核菌 发酵条件 防治效果
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乌头内生细菌JY-3-1R的鉴定及其生防和促生能力研究
《生物技术通报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：分离筛选具生防和促生潜力的乌头内生细菌,为乌头土传病害防治提供优质微生物菌种.采用纯培养法从健康乌头分离内生细菌,对峙试验检测菌株拮抗病原菌能力,多位点持家基因序列鉴定菌株分类地位,平板法检测菌株产酶和铁载体能力,比色法检测菌株产IAA能力,大田试验检测菌株对乌头生长的影响和白绢病的生防潜力.从 111 株乌头内生细菌中筛选到 1株对白绢病和根腐病病原菌有显著抑制作用的内生细菌JY-3-1R,该菌鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).JY-3-1R无细胞发酵滤液对齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)菌丝生长和菌核萌发抑制率达 100%.该菌具产IAA、铁载体、蛋白酶、纤维素酶和葡聚糖酶的能力,同时包含合成伊枯草菌素、丰原素、表面活性素、芽孢菌霉素、杆菌溶素、杆菌烯和大环内酯的功能基因.大田条件下,JY-3-1R接种降低乌头白绢病发病率高达 40%,生防效率为 61.53%-84.61%,生防能力持续 30 d,同时植株茎、主根和子根干重分别提高了 34.34%、82.59%和 56.08%.JY-3-1R兼具生防和促生能力,具有开发作为乌头生物肥料和生防材料的潜力.
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乌头产吲哚乙酸内生细菌遗传多样性、抗逆性及其对水稻幼苗生长的影响
《微生物学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[目的]探究乌头产吲咮乙酸(IAA)内生细菌的遗传多样性、溶磷解钾能力、抗逆能力及其对水稻幼苗生长的影响,为道地产区乌头产业可持续发展提供科技支撑.[方法]从健康乌头植株分离可培养内生细菌,采用Salkowski比色法测定内生细菌产IAA能力,16S rDNA限制性片段长度多样性(16S rDNA-RFLP)及16S rDNA全长序列研究其遗传多样性及系统发育地位,平板培养法测定产IAA内生细菌溶磷解钾及其对pH、温度、盐、抗生素等的耐受能力,平板法测定菌悬液浸泡后水稻种子萌发率和室内水培法探究产IAA内生细菌对水稻幼苗生长的影响.[结果]从健康乌头植株分离获得24株高产IAA的内生细菌,其分泌IAA的值为21.39-84.43 mg/L.16S rDNA-RFLP分析表明,24株产IAA的内生细菌可分为12个类群,代表菌株16S rRNA基因系统发育结果显示这些菌分属于肠杆菌属(Enterobacter)、克雷伯氏杆菌属(Klebsiella)、泛菌属(Pantoea)、假单胞菌属(Pseudomonas)、微杆菌属(Micrabacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、鞘氨醇杆菌属(Sphingobacterium)和金黄杆菌属(Chryseobacterium),表现出较丰富的遗传多样性.另外,24株菌中有12株菌具有较强的溶钾能力,大部分供试菌株可耐受较广范围的pH、温度和盐浓度,但对抗生素耐受性不强;10株内生细菌可显著提高水稻种子的萌发率,16株内生细菌可显著促进水稻幼苗的生长,综合筛选出3株内生细菌(JY1-1S、JY3-6S和JY10-1L)既能提高水稻种子发芽率,又能促进水稻幼苗生长.[结论]乌头植株含有较丰富的高产IAA的内生细菌资源,且其遗传多样性丰富;本研究筛选出3株对水稻种子萌发和幼苗生长具显著促进作用的内生细菌,可为后续生物肥料的开发提供优质菌种.
关键词： 乌头 内生细菌 IAA 遗传多样性 促生 溶磷解钾 抗逆性 水稻
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杉木内生细菌SM-1的鉴定及其对杉木赤枯病的防治效果
《福建农业学报 》 2021 CSCD
摘要：【目的】杉木赤枯病是杉木的重要病害之一,严重威胁杉木苗木生产及幼树成林。为了更好保护杉木,防治杉木赤枯病,从杉木叶片分离到内生细菌SM-1,探讨其对杉木赤枯病菌（Pestalotiopsis apiculatus）的拮抗作用。【方法】经形态观察、生理生化特性观察、16S rRNA及Biolog系统鉴定其种类;含毒平板及牛津杯法检测SM-1无菌发酵液对赤枯病菌的抑制率,并观察SM-1对赤枯病菌菌丝形态的影响;离体枝条的叶片接种试验检测SM-1无菌发酵液的防病效果。【结果】SM-1为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）,其无菌发酵液对赤枯病菌的抑制率可达58.80%;显微观察显示SM-1能够使赤枯病菌菌丝生长受到抑制,细胞膨大成球形;离体枝条的叶片接种试验揭示SM-1无菌发酵液对杉木赤枯病的抑制效率达95%,能够极显著减轻叶片发病程度（P<0.01）。【结论】杉木内生芽孢杆菌SM-1对杉木赤枯病具有良好的生物防治潜力。
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秦艽内生真菌Alternaria alternata QJ15的生长特性及抗氧化活性研究
《华西药学杂志 》 2018 CSCD
摘要：目的研究秦艽内生真菌Alternaria alternata QJ15的生长特性和抗氧化活性。方法以菌丝生长速率为指标,评价菌株生长的最适培养基、碳氮源、pH、温度及菌株对NaCl、重铬酸钾的耐受性分别用石油醚、环己烷、乙酸乙酯、正丁醇和甲醇等5种有机溶剂提取A.alternata QJ15菌丝体中的活性物质,采用DPPH法测定不同极性溶剂提取物的抗氧化活性。结果秦艽内生真菌A.alternata QJ15菌株可在多种培养基中生长,最适固体培养基为燕麦培养基,最适生长的碳源和氮源分别为麦芽糖和酵母提取物,菌株生长pH为4.011.0,最适生长pH为8.0,菌株生长温度为1637℃,最适生长温度为28℃,菌株对NaCl、重铬酸钾具有一定的耐受性。A.alternata QJ15菌丝体在不同极性溶剂的提取物均有抗氧化活性,其中,甲醇提取物优于其他溶剂的提取物,当3 mg·mL~(-1)时,对DPPH自由基的清除率为46.2%。结论秦艽内生真菌A.alternata QJ15具有较好的抗氧化潜力。
关键词： 秦艽 内生真菌 交链格孢 生长特性 抗氧化活性 耐受性 生长速率
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四川3种商业块菌内生真菌的分离及鉴定
《中国农学通报 》 2018
摘要：旨在探究四川块菌主产区商业块菌的内生可培养真菌的群落结构及物种多样性。采集四川省凉山彝族自治州4个块菌产区(新田乡、新云乡、淌塘镇、雪山乡)的新鲜块菌子囊果作为实验材料,用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)对采集子囊果中的内生真菌进行分离培养,通过分子方法鉴定分离菌株的种属。从印度块菌(Tuber indicum)、假凹陷块菌(Tuber pseudoexcavatum)以及中华夏块菌(Tuber sinoaestivum)中共分离得到21株丝状真菌,分属于木霉属(Trichoderma)、毛壳属(Chaetomium)、青霉菌属(Penicillium)、镰刀菌属(Fusarium)以及链格孢属(Alternaria)。木霉属、镰刀菌属以及青霉菌属在块菌的子囊果中分布较丰富。初步鉴定出四川3种商业块菌的内生可培养真菌的种类,对块菌的储存保鲜、指导菌根化苗培育、探究块菌的发生机理机制都有重要意义,但对于具体原理还需要进一步探究。
关键词： 印度块菌 假凹陷块菌 中华夏块菌 内生真菌 分离 鉴定
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块菌(松露)宿主可培养内生菌群落结构与多样性研究
《微生物学杂志 》 2018 CSCD
摘要：探究四川凉山彝族自治州块菌主产区华山松内生菌群的结构及多样性。在会东县选取4个点(新田乡、新云乡、淌塘镇、雪山乡)的块菌宿主华山松的根、茎、叶为实验材料,通过不同培养基分离样品根、茎、叶的内生细菌、真菌、放线菌,DNA分子鉴定分离菌株的种属,最终分离得到细菌46株,其中欧文氏菌属(Erwinia)5株,沙门氏菌属(Salmonell)1株,杆菌属(Bacillus)22株,葡萄球菌属(Staphylococcus)2株,假单胞菌属(Pseudomonas)2株,类芽胞杆菌属(Paenibacillus)2株,布丘氏菌属(Buttiauxella)2株,肠杆菌属(Enterobacte)3株,爱文氏菌属(Ewingella)1株,泛菌属(Rahnella)1株,拉恩氏菌属(Rahnella Izard)2株,其他属3株;真菌19株,均为子囊菌门(Ascomycota),其中青霉属(Penicillium)4株,疱霉属(Phoma)1株,子囊菌门未知菌1株,篮状菌属(Cladosporium)1株,分枝孢子菌属(Sydowia)1株,曲霉属(Aspergillus)1株,其他属10株;放线菌33株,为链霉菌属(Streptomyces)22株,短小杆菌属(Curtobacterium)2株,短杆菌属(Brevibacterium)1株,其他属8株。研究结果表明,来自不同地点、不同植株部位、不同培养基分离得到的块菌宿主华山松内生菌有差异,证实微生物在土壤、块菌、宿主植物之间有着复杂的相互作用,为块菌的人工栽培提供参考。
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红地球葡萄健康叶片内生细菌多样性分析
《植物病理学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：本研究利用平板分离方法和变性凝胶梯度电泳(DGGE)技术,分析了北京、成都、合肥、武汉等4个地区的红地球葡萄在开花期、成熟期和衰老期健康叶片中内生细菌的群落结构。平板分离培养结果表明不同地区葡萄叶片中的内生细菌数量在8.0×10~3~2.8×10~4CFU·g~(-1)之间,其中武汉地区最高;不同生长时期葡萄叶片中的内生细菌数量在0.8×10~3~1.5×10~4CFU·g~(-1)之间,其中成熟期数量最大。扩增16S rRNA基因序列鉴定,分离获得的内生细菌属于芽胞杆菌属、泛菌属、短小杆菌属、假单胞菌属和葡萄球菌属,芽胞杆菌属为常见菌群。DGGE分析结果显示,同一地区和同一生长时期的样品间相似性较高;不同地区以成都地区的内生细菌种类最丰富;不同生长时期以成熟期种类最多。对特征条带回收测序,结果显示不可培养细菌和未确认的海洋浮游细菌在葡萄叶片中大量存在。
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