科研产出
转Bt基因抗虫棉外源Bt蛋白的差异表达
《西南农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究转Bt基因抗虫棉外源Bt蛋白表达的时空规律,明确Bt蛋白表达量和转Bt基因抗虫棉抗性的内在联系,更加有效降低靶标害虫危害。【方法】采用ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)蛋白定量检测方法,以转Bt基因抗虫棉鄂抗虫棉1号(GK19)为研究材料,对转Bt基因抗虫棉不同组织器官、不同生长时期主茎功能叶和不同生长时期主茎不同叶位叶片的Bt蛋白含量进行检测。【结果】转Bt基因抗虫棉不同组织器官Bt蛋白含量存在差异,苗期叶片最高,花、蕾、铃次之,根、茎较低;不同生长时期主茎功能叶Bt蛋白含量呈现出随生长发育时间推进而降低的趋势;不同生长时期主茎不同叶位叶片Bt蛋白含量差异较大,苗期和盛蕾期第1~7叶呈现出逐渐下降的趋势,而盛花期和盛铃期第1~7叶呈现出先缓慢升高后逐渐稳定的趋势。【结论】Bt蛋白在转Bt基因抗虫棉各生长时期,各组织器官都有表达,且表达量呈时空动态变化。
关键词： 转Bt基因抗虫棉 ELISA Bt蛋白含量 差异表达
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样品制备对转基因抗虫棉外源Bt蛋白定量检测的影响
《棉花学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：采用ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)方法,以转Bt基因抗虫棉品种中棉所45(ZGK 9822)和鄂抗虫棉1号(GK 19)为研究材料,对叶片的不同组织、同一样品不同的冻存时间和同一样品不同研磨程度的Bt蛋白进行定量检测。结果表明:叶片不同组织Bt蛋白表达量差异较小,叶脉Bt蛋白表达量略高于叶肉和叶柄的Bt蛋白表达量;转基因抗虫棉单位鲜物质质量Bt蛋白含量和单位可溶性总蛋白Bt蛋白含量随着冻存时间的延长而降低,鄂抗虫棉1号单位鲜物质质量Bt蛋白含量冻存90 d样品与冻存30 d、60 d样品差异显著,单位可溶性总蛋白Bt蛋白含量无显著差异;不同研磨程度对转基因抗虫棉单位鲜物质质量Bt蛋白含量和单位可溶性总蛋白Bt蛋白含量都存在影响,其中差异最大的为鄂抗虫棉1号,200目试样比50目试样单位鲜物质质量Bt蛋白含量上升了56%,单位可溶性总蛋白Bt蛋白含量上升了38%。
关键词： 转基因抗虫棉 样品制备 Bt蛋白含量 定量检测 ELISA
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抗鹅细小病毒卵黄IgG的制备及其间接ELISA检测方法的建立
《中国兽医科学 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提与DEAE50纤维素层析相结合的方法从免疫鹅细小病毒(GPV)的鹅卵内提取鹅卵黄IgG,通过核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG的浓度和纯度后,制备兔抗鹅IgG酶标抗体;建立了针对GPV的间接ELISA抗体检测方法,确定其最佳工作条件,并对该ELISA的特异性及重复性进行检测;应用该间接ELISA检测了GPV VP3基因疫苗的免疫效果。结果显示,获得的纯化鹅卵黄IgG浓度为10mg/mL,抗体纯度达到94.5%,兔抗鹅IgG的血清琼脂扩散效价约为1∶32;经筛选确定该ELISA的最佳工作条件为:最适抗原包被浓度为20μg/mL,最适血清稀释度为1∶100,酶标抗体的最佳工作浓度为1∶3 000。用建立的间接ELISA检测禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒的阳性血清均为阴性,表明该方法特异性强、重复性好。经临床初步应用,能检出GPV VP3基因疫苗产生的抗体,在肌肉注射100μg与200μg基因疫苗的鹅血清中,IgG均从第14天开始上升,并分别在第35、21天达到最大值。表明本试验制备的兔抗鹅IgG酶标抗体具有较好的应用价值。
关键词： 抗鹅细小病毒卵黄IgG 纯化 间接ELISA 应用
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葡萄A病毒四川分离物的外壳蛋白基因克隆与原核表达
《园艺学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)是葡萄病毒属(Vitivirus)的典型种,在世界葡萄产区广泛分布。采集10株‘藤稔’葡萄成熟枝条,使用6种葡萄病毒ELISA试剂盒检测发现,10个样本中有6个感染4种不同的葡萄病毒。以GVA的ELISA阳性植株为材料进行RT-PCR扩增,首次获得了GVA四川分离物SL10的完整外壳蛋白基因(CP),该基因全长597bp。将其与GenBank收录的15个GVA分离物的CP序列进行比对和构建系统进化树,把不同地理起源的GVA分离物分成两个变异组,其中Ⅰ组包括3个分离物(与Ⅱ组的其他分离物只有75.9%~80.1%的序列同一性);其余的13个分离物组成Ⅱ组(组内分离物具有84.4%~99.5%的序列同一性)。构建了GVACP的原核表达质粒PET-30-GVAcp并转化BL21菌株,经IPTG诱导,目的基因得到了大量表达。
关键词： 葡萄 葡萄A病毒 ELISA RT-PCR 外壳蛋白基因 原核表达
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部分葡萄品种的病毒病鉴定及健康状况评价
《果树学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：应用血清学的酶联免疫吸附法(ELISA),对采自四川省内4个葡萄主产区内的34个葡萄品种,共计199份枝条样本进行了葡萄病毒病的检测和分析。在被测试的26个鲜食葡萄品种中,18个品种被1种或多种危险性的目标病毒所感染,品种感染率为69.2%;而在8个酿酒葡萄品种中,仅1个品种感染了危险性病毒,感染率为12.5%。在5个受测目标病毒和类型中,GLRaV-3的发生和危害最为普遍,其单个采样点的样本感染率为25.5%￣56.3%,其次为GVA0￣25.5%,GVB0￣12.5%和GLRaV-20￣4.5%,GFLV在本次试验中未被检测到。在每个取样点,感病品种一般所有单株都被同一种病毒感染,因此葡萄繁殖材料的引入是危险性病毒进入新产区的主要途径;而在生产实践中,高接换种方式会成倍增加葡萄病毒传播侵染的风险性。
关键词： 葡萄品种资源 病毒病鉴定 ELISA 健康状况评估
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