科研产出
猪链球菌3型的分离鉴定及耐药性分析
《黑龙江畜牧兽医 》 2024 北大核心
摘要：为查明四川地区某规模化猪场猪发病死亡原因并进行有效防控，试验采集病死猪肺脏组织样本4份进行细菌的分离，并对分离菌株进行菌落形态观察、革兰氏染色和镜检、猪链球菌的PCR鉴定、血清型鉴定、主要毒力基因检测、药敏试验和耐药基因检测。结果表明：从病料中共分离到4株菌，4株分离菌株在胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)中均呈灰白色、针尖状、圆形的菌落，革兰氏染色后镜检可见呈蓝紫色、圆形或卵圆形、链状排列的革兰氏阳性菌，符合猪链球菌的形态特征，分别命名为SYS9、SYS14、SYS15和SYS16。经猪链球菌的PCR鉴定和血清型鉴定确定4株分离菌株均为猪链球菌3型。4株猪链球菌分为2种毒力基因型，SYS9株的毒力基因型为mrp+epf+sly+fbps+cps-orf2+,SYS14、SYS15和SYS16的毒力基因型为mrp+epf+sly+fbps+cps+orf2+;4株猪链球菌均对四环素和泰乐菌素耐药，且均对阿莫西林(青霉素类药物),氟苯尼考和氯霉素(酰胺醇类药物),利奈唑胺(口恶唑烷酮类药物),头孢匹罗、头孢氨苄和头孢拉定(头孢菌素类药物),环丙沙星和左氟沙星(喹诺酮类药物)敏感。除SYS9株仅对四环素和泰乐菌素耐药外，其余3株菌均为3重或3重以上耐药菌株，其中SYS15株为6重耐药菌株。4株猪链球菌均未检出耐药基因ermA、mefA、msrD、fexA、fexB、aph(3′)-Ⅲa、ant(6′)-Ⅰa、aph(2′)-Ⅰb; SYS9株检出耐药基因tetO和ermB,SYS14株检出耐药基因tetM、tetO、ermB、aac(6′)-aph(2″)和optrA,SYS15株检出耐药基因tetM、tetO、tetL、ermB、aac(6′)-aph(2″)和optrA,SYS16株检出耐药基因tetM、tetO、tetL、ermB、aac(6′)-aph(2″)、optrA和Lsa(E)。说明该规模化猪场猪发病死亡原因为猪链球菌3型感染，可使用青霉素类、酰胺醇类、口恶唑烷酮类、头孢菌素类、喹诺酮类药物进行治疗。
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猪流行性腹泻病毒CH/SCJY/2022株的分离鉴定及遗传进化分析
《黑龙江畜牧兽医 》 2024 北大核心
摘要：2022年四川省简阳地区某规模化猪场仔猪发生严重腹泻甚至死亡，疑似猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）感染。为确定病原并了解其遗传进化特征，试验无菌采集病死腹泻仔猪小肠组织样本，提取RNA后采用RT-PCR方法对病原进行检测，并对病毒进行分离和半数组织培养感染剂量(TCID50)测定、间接免疫荧光试验、全基因组测序和遗传进化分析。结果表明：腹泻仔猪小肠组织样本为PEDV阳性，小肠组织过滤上清液接种Vero细胞盲传至第3代出现致细胞病变效应（cytopathic effect, CPE）,盲传至第9代时出现稳定的CPE,第9代病毒液的TCID50为1×10-5.2/0.1 mL;在以鼠源抗PEDV-S蛋白单克隆抗体为一抗、FITC标记的羊抗鼠IgG为二抗的间接免疫荧光试验中，接种分离毒株的Vero细胞呈现特异性绿色荧光，未接种分离毒株的Vero细胞无特异性绿色荧光。将分离毒株命名为CH/SCJY/2022。经PCR分段扩增、测序、拼接后得到CH/SCJY/2022株全基因组序列，大小为28 038 bp。CH/SCJY/2022株S基因、ORF3基因、M基因、N基因与参考毒株（CV777、AJ1102、LW/L、virulent DR13、LZC）核苷酸相似性分别为93.11%～97.71%、95.41%～98.37%、96.62%～98.09%、94.72%～96.38%。CH/SCJY/2022株全基因组序列与30株PEDV参考毒株核苷酸相似性为96.0%～98.9%,其中与强毒变异株YC2014的相似性最高（98.9%）,与韩国毒株SM98的相似性最低（96.0%）,与疫苗毒株CV777、AJ1102的相似性分别为96.4%和98.3%。基于全基因组序列构建的遗传进化树中可见CH/SCJY/2022株与CH/SCZY103/2017位于同一小分支，亲缘关系最近，属于GⅡb基因亚群；与疫苗毒株LW/L、AJ1102、XJ-DB2、CV777、attenuated DR13的亲缘关系较远。与参考毒株（attenuated DR13、LW/L、CV777、AJ1102、XJ-DB2）相比，CH/SCJY/2022株S蛋白氨基酸序列存在6处特有的氨基酸位点突变，分别为N139D、I289M、R492K、F541L、L1000M、S1080L。说明试验成功从该养猪场腹泻仔猪小肠组织样本中分离鉴定到1株PEDV GⅡb亚群变异株，并获得了该毒株的全基因组序列，具有独特的分子特征。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 全基因组测序 同源性分析 遗传进化分析 分离 鉴定
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西藏土壤芽孢杆菌的分离鉴定及生防促生菌筛选
《江苏农业科学 》 2023 北大核心
摘要：青稞是西藏人民的主要粮食作物，在种植生长过程中有多种病害对其产生危害，直接影响青稞的产量和质量。本研究针对如何绿色防治西藏青稞网斑病立题，以期找到对某一种或几种青稞病害高效的生防菌株，为青稞网斑病防治及生产实际提供材料。采集林芝市鲁朗镇扎西岗村的青稞网斑病植株活体样本，采用组织分离法和离体培养法获得青稞网斑菌菌株XZQKWB。从西藏自治区不同采样点采集根际土壤，采用温度筛选法和平板涂布法分离得到11 718株芽孢杆菌。以分离得到的芽孢杆菌为材料，以6种病原菌为靶标，共筛选得到14株对6种病原菌均具有不同程度的抑制效果的芽孢杆菌：91-5、92-1、92-10、92-3、27-36、32-69、94-19、44-36、5-142、58-59、58-7、59-60、63-35和66-53。结合形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列分析，初步鉴定58-7、59-60、27-36、63-35、44-36、58-59和66-53为阿氏芽孢杆菌（Priestia aryabhattai）;菌株94-19和32-69为沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis）;菌株92-10和92-3为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）;菌株91-5为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）;菌株92-1和5-142为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对14株菌进行生防盆栽和促生盆栽试验，结果表明菌株92-10兼具溶无机磷能力、解钾能力、固氮能力等促生特性，对藏青2000种子的根长、芽长、株高、地上部鲜质量都有明显的促生效果，在平皿对峙试验中对6个病原菌的抑制率均达到50%以上，在青稞网斑病的盆栽防治试验中防效达到76.5%。
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四川部分地区猪链球菌的分离鉴定及其毒力基因型和耐药性研究
《黑龙江畜牧兽医 》 2023 北大核心
摘要：为了解四川地区猪链球菌流行毒株的血清型、毒力基因型及耐药情况,试验采集 2021-2022年四川部分地区生猪养殖场死亡猪肺脏组织151 份,对疑似猪链球菌的菌株进行分离与鉴定,并对分离到的猪链球菌菌株进行血清型鉴定,对可定型猪链球菌菌株进行毒力因子(sly、mrp、epf)检测和药敏试验.结果表明:151 份肺脏组织样品中,共分离鉴定出猪链球菌 32 株;在分离到的 32 株猪链球菌菌株中,可定型菌株有24 株,分属于8 种血清型.其中血清 16 型有 10 株,占比 31.2%,为优势血清型;血清2 型有7 株,占比21.9%;血清9 型有2 株,占比 6.3%;血清 1 型、4 型、5 型、7 型、30 型各有1 株,均占比3.1%.未定型菌株有8 株,占比 25.0%.24 株可定型菌株共检出 5 种毒力基因型,分别为sly+mrp-epf-(11/24)、sly+mrp+epf+(1/24)、sly-mrp-epf-(8/24)、sly-mrp+epf+(1/24)、sly+ mrp+epf-(3/24),其中优势毒力基因型为sly+mrp-epf-.24 株猪链球菌对林可霉素的耐药率最高,为100%;其次是克林霉素和氟苯尼考(均为 91.7%);对头孢匹罗的耐药率最低(37.5%).24 株猪链球菌整体耐药情况严重,其中 20 株菌株表现为多重耐药,占比 83.3%;1 株菌株为 8 耐,即对本试验中的8 类抗生素均耐药.说明四川地区猪链球菌存在多种血清型,其中 16 型、2 型为主要血清型,sly+mrp-epf-为优势毒力基因型,整体耐药情况严重,且绝大多数菌株属于多重耐药菌株.
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一株高产乳酸菌株的鉴定及其发酵特性研究
《中国酿造 》 2021
摘要：采用MRS培养基从果醋醋醅中分离具有强产酸能力的乳酸菌,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定,并研究其乙醇耐受能力、产酸能力和抗生素敏感性.结果表明,从果醋醋醅中分离得到一株产酸能力较高的菌株,编号为D2,并鉴定其为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus),该菌株在体积分数4%乙醇条件下能够正常生长,在体积分数14%乙醇条件下能够存活,具有较强的乙醇耐受力;在MRS肉汤培养基中发酵48 h时,总酸含量达到20.03 g/L,其中乳酸含量增加最多,其次是苹果酸和琥珀酸;对四环素、氯霉素、红霉素和吉他霉素敏感,对链霉素、卡那霉素、青霉素、苯唑西林和复方新诺明具有耐药性.综上,该菌株具有较强的乙醇耐受能力和产乳酸能力,安全性高,有作为发酵菌剂改善果醋风味和口感的潜在应用价值.
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恩施鲊广椒乳酸菌的分离鉴定及其对挥发性风味物质的影响
《中国酿造 》 2019 北大核心
摘要：采用传统培养方法对采集自湖北恩施地区的15份鲊广椒样品中的乳酸菌进行分离,采用分子生物学技术对其进行鉴定。然后,采用优势乳酸菌制作鲊广椒,并利用电子鼻技术分析其挥发性风味物质。最后,通过主成分分析(PCA)筛选出适合鲊广椒发酵的乳酸菌菌种。结果表明,从鲊广椒样品中共分离鉴定出植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)10株、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)3株、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)1株和食品乳杆菌(Lactobacillus alimentarius)1株,其中,L. plantarum占总分离菌株的66.67%,是湖北恩施鲊广椒中的优势乳酸菌。电子鼻分析结果表明,与对照相比,添加L. plantarum的鲊广椒芳香类物质明显增多,氮氧化物、氢化物、有机硫化合物和烷烃等物质含量显著降低。PCA结果表明,L. plantarum HUBAS51132和HUBAS51141制作的鲊广椒其芳香性更好。
关键词： 恩施鲊广椒 乳酸菌 分离 鉴定 挥发性风味物质 电子鼻
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人造沸石对甘薯不同链长直支链淀粉的分离效果
《农业工程学报 》 2019 EI 北大核心 CSCD
摘要：柱层析法是根据混合物中各组分的理化性质差异,利用混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经过多次分配将组分分离纯化.该文采用回生法分离甘薯直、支链淀粉后再进行二次回生,以窄化其分子链长,并采用柱层析法分离出不同分子量分布范围的淀粉组分,直、支链淀粉组分总制备率均大于2.4%.可见光谱及分子量分布研究表明,粒径为1~3 mm的人造沸石适合分离支链淀粉,粒径为4~6 mm的人造沸石适合分离直链淀粉.经大沸石分离,聚合度大的直链淀粉分子依赖沸石表面吸附,洗脱速度快,先被洗脱下来,聚合度较小的直链淀粉分子进入沸石孔隙内部,吸附力大,后被洗脱下来;经小沸石分离,甘薯支链淀粉组分F1b中分子量小、均一度高的组分先被洗脱下来,F2b中分子量大、均一度低的组分先被洗脱下来,说明甘薯直、支链淀粉的分支度对淀粉组分的分离也有一定影响.X射线衍射表明,甘薯直链淀粉组分在18.9°、23.4°、27.2°、29.3°、32.3°、33.7°附近出现强衍射峰,甘薯支链淀粉组分在21.6°、22.9°、23.9°、26.5°、27.1°、29.3°、34.1°、35.8°、39.5°附近也出现明显的衍射峰,此时甘薯直、支链淀粉的分子量分布指数(PDI,polydispersity index)均接近1.0.人造沸石柱层析可制备出分子量分布范围极窄的甘薯直、支链淀粉,该类淀粉表现出类似金属盐的X射线衍射峰,可作为深入研究淀粉大分子空间结构变化的材料.显微图片显示直链淀粉是由多个线型分子聚集在一起,呈典型的"柳条"状,而支链淀粉呈典型的"树枝"状.该研究提供了一种大量制备分子量分布范围极窄的直、支链淀粉的简单、高效方法,为深入探索淀粉大分子聚集过程中的形态变化创造了有利条件.
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“金艳”猕猴桃贮期腐烂病病原菌的分离鉴定
《安徽农业科学 》 2018
摘要：[目的]明确"金艳"猕猴桃贮期腐烂病病原菌的种类。[方法]采用形态学及分子生物学方法对"金艳"猕猴桃贮期致腐微生物进行分离鉴定。[结果]与"金艳"猕猴桃贮藏期间腐烂相关的菌有Botrytis cinerea、Sclerotinia sclerotiorum、Eutypella microtheca、Penicillium expansum、Cladosporium cladosporioides共5种。其中对于Botrytis cinerea、Sclerotinia sclerotiorum、Penicillium expansum 3种菌已有猕猴桃致腐的报道,Eutypella microtheca、Cladosporium cladosporioides感染猕猴桃为首次报道。[结论]该研究为"金艳"猕猴桃采后腐烂病防治研究提供了科学依据。
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四川3种商业块菌内生真菌的分离及鉴定
《中国农学通报 》 2018
摘要：旨在探究四川块菌主产区商业块菌的内生可培养真菌的群落结构及物种多样性。采集四川省凉山彝族自治州4个块菌产区(新田乡、新云乡、淌塘镇、雪山乡)的新鲜块菌子囊果作为实验材料,用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)对采集子囊果中的内生真菌进行分离培养,通过分子方法鉴定分离菌株的种属。从印度块菌(Tuber indicum)、假凹陷块菌(Tuber pseudoexcavatum)以及中华夏块菌(Tuber sinoaestivum)中共分离得到21株丝状真菌,分属于木霉属(Trichoderma)、毛壳属(Chaetomium)、青霉菌属(Penicillium)、镰刀菌属(Fusarium)以及链格孢属(Alternaria)。木霉属、镰刀菌属以及青霉菌属在块菌的子囊果中分布较丰富。初步鉴定出四川3种商业块菌的内生可培养真菌的种类,对块菌的储存保鲜、指导菌根化苗培育、探究块菌的发生机理机制都有重要意义,但对于具体原理还需要进一步探究。
关键词： 印度块菌 假凹陷块菌 中华夏块菌 内生真菌 分离 鉴定
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紫薯加工废水中花青素的快速分离方法
《江苏师范大学学报(自然科学版) 》 2016
摘要：如何简单高效地分离回收紫薯加工废水中具有高附加值的花青素,避免资源浪费,是紫薯加工生产中亟待解决的问题.通过调节紫薯加工废水溶液的pH值,考察其中花青素在不同pH水溶液中与蛋白、多糖等产生共沉淀的效率.结果显示,在pH为3~5时,离心3 000r/min,5min,废水溶液中的花青素均能很好地沉淀,尤其是在pH为4时,离心沉淀效果最佳,沉淀效率达90%以上,浓缩倍数大于9.在pH为4,5时,废水中的花青素经12h过夜自然沉淀,沉淀效率为80%左右,但沉淀疏松,水分含量大.盐酸、醋酸和柠檬酸对花青素的沉淀回收无显著差别.此外,考察该方法对苋菜红标准品、紫甘蓝和紫葡萄花青素水溶液在不同pH下的沉淀效果,结果均不能获得沉淀.因此,本方法仅适用于紫薯加工废水中花青素的快速沉淀分离.
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