科研产出
单链抗体hs83基因植物表达载体的构建
《西南农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：成功构建了单链抗体hs83基因植物表达载体pCAMB IA1301-hs83。首先根据基因的序列重新设计了两条含有合适酶切位点的引物,酶切位点保证了基因能够插入取代pCAMB IA1301上GUS基因的第二外显子;第二步是PCR反应克隆目的基因,然后连接到pMD-18 T载体,进行测序鉴定;第三步是对pCAMB IA1301质粒和T-hs83质粒进行双酶切,释放出两个目的片段,分别回收后连接,酶切鉴定后将重组子通过冻融法转化根癌农杆菌EHA105,并用PCR法进行鉴定。
关键词： hs83基因 植物表达载体 pCAMBIA1301 PCR 农杆菌
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葡萄A病毒四川分离物的外壳蛋白基因克隆与原核表达
《园艺学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)是葡萄病毒属(Vitivirus)的典型种,在世界葡萄产区广泛分布。采集10株‘藤稔’葡萄成熟枝条,使用6种葡萄病毒ELISA试剂盒检测发现,10个样本中有6个感染4种不同的葡萄病毒。以GVA的ELISA阳性植株为材料进行RT-PCR扩增,首次获得了GVA四川分离物SL10的完整外壳蛋白基因(CP),该基因全长597bp。将其与GenBank收录的15个GVA分离物的CP序列进行比对和构建系统进化树,把不同地理起源的GVA分离物分成两个变异组,其中Ⅰ组包括3个分离物(与Ⅱ组的其他分离物只有75.9%~80.1%的序列同一性);其余的13个分离物组成Ⅱ组(组内分离物具有84.4%~99.5%的序列同一性)。构建了GVACP的原核表达质粒PET-30-GVAcp并转化BL21菌株,经IPTG诱导,目的基因得到了大量表达。
关键词： 葡萄 葡萄A病毒 ELISA RT-PCR 外壳蛋白基因 原核表达
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苏云金芽孢杆菌猝倒亚种Cry1 Aa13基因的克隆及序列分析
《四川大学学报(自然科学版) 》 2004 北大核心 CSCD
摘要：根据GenBank中Cry1A类基因序列设计一对特异性引物,以苏云金芽孢杆菌猝倒亚种质粒DNA为模板,应用PCR扩增技术得到一大小约为3.6kb的DNA片段(Cry1Aa13).通过引物步行法测定该片段长3598bp,其中开放阅读框(ORF)长3540bp,编码1180个氨基酸,分子量为133.49kD,等电点pI=5.0.序列比较表明该基因与Cry1Aa类基因高度同源(达95%以上),该基因已在GenBank中登录,登录号为AF510713,并被Btδ 内毒素基因国际命名委员会正式命名为Cry1Aa13.
关键词： 苏云金芽孢杆菌猝倒亚种 Cry1Aa13 PCR 克隆 序列分析
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家蚕核型多角体病毒埃及株p10基因的克隆及结构特征分析
《农业生物技术学报 》 2003 CSCD
摘要：根据BmNPVT3株中p10基因侧翼保守序列设计一对特异性引物,以家蚕核型多角体病毒埃及株(Bombyxmori nuclearpolyhedrosisvirusstrainEgyptian,BmNPVEg)基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增得到p10基因(GenBank登录号:AF533970)。扩增片段全长为877bp,含有1个213bp的开放阅读框(ORF)、编码70个氨基酸,推测其分子量为7.5kD。序列分析表明:与苜蓿银纹夜蛾(Autographacalifornica)核型多角体病毒(AcMNPV)p10基因及张耀洲得到的BmNPVp10基因相比,BmNPV埃及株及BmNPVT3株的p10基因由于在ORF的第209nt后缺失了1个dATP,从而导致他们的编码区减少了24个氨基酸残基。与BmNPVT3p10相比,BmNPVEgp10又缺失了终止密码子TAA后66~67nt的1个10bp的序列,其中包括poly(A)信号序列。
关键词： 家蚕核型多角体病毒 埃及株 p10基因 PCR 序列分析
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