科研产出
水稻B-box锌指蛋白基因OsBBX26的 克隆及表达分析
《南方农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]克隆水稻B-box锌指蛋白基因(OsBBX26),并分析其在非生物胁迫下的表达模式,为探究水稻B-box蛋白的非生物胁迫响应机制提供理论依据.[方法]以水稻模式品种日本晴为材料,采用RT-PCR克隆OsBBX26基因,对其进行生物信息学分析,并通过构建pBA-OsBBX26-YFP植物表达载体进行亚细胞定位.同时,采用实时荧光定量PCR检测分析OsBBX26基因的组织特异性及非生物胁迫(干旱、ABA、低温和高盐)下的表达模式.[结果]克隆获得的OsBBX26基因(LOC_Os08g42440)cDNA全长序列为1467 bp,编码488个氨基酸,其编码蛋白分子量为51.86 kD,理论等电点(pI)为6.63,包含1个B-box锌指结构域和1个CCT结构域,其中B-box结构域位于第13~60位氨基酸,CCT结构域位于第435~478位氨基酸,该蛋白定位于细胞核中.OsBBX26基因位于8号染色体上,启动子区域除了含有TATA-Box和CAAT-Box等基本转录元件外,还含有与逆境相关的顺式作用元件,包括低温响应元件LTR、脱落酸响应元件ABRE、水杨酸响应元件TCA-element、厌氧响应元件ARE、茉莉酸甲酯响应元件CGTCA-motif和TGACG-motif,以及MYB转录因子结合位点.OsBBX26蛋白与粳稻B-box蛋白亲缘关系最近,其次与籼稻B-box蛋白亲缘关系较近,与其他植物B-box蛋白也存在较高的相似性,其中与小米、大麦、高粱、玉米和短柄草B-box蛋白的氨基酸序列相似性分别达72%、72%、71%、69%和68%.OsBBX26基因在幼叶中的表达量最高,其次是在成熟叶片中,在幼根、成熟根、茎和幼穗中的表达量均极低,表明该基因表达具有明显的组织表达特异性.干旱、高盐、ABA和低温胁迫处理下OsBBX26基因均上调表达,干旱、高盐和ABA胁迫处理12 h达峰值,但低温胁迫处理在24 h后才达峰值.[结论]OsBBX26基因受干旱、高盐、ABA和低温胁迫诱导均上调表达,推测其参与水稻植株响应多种非生物胁迫,在逆境响应中发挥重要调控作用.
关键词： 水稻 B-box蛋白 克隆 非生物胁迫 表达分析 组织表达
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乌桕Cu/Zn超氧化物歧化酶基因克隆及耐盐性
《四川师范大学学报(自然科学版) 》 2016 北大核心
摘要：利用RT-PCR和RACE技术,成功获得了乌桕Cu/Zn超氧化物歧化酶(SsCu/Zn SOD)的cDNA全长.该序列含有486 bp的完整开放阅读框(Gen Bank登录号为KX169161),编码161个氨基酸残基,推测其相对分子质量为16.304 k Da,等电点为6.57.对应开放阅读框的基因组序列含有7个外显子和6个内含子.同源性及保守结构域分析显示SsCu/Zn SOD和其他物种的Cu/Zn SOD有较高的同源性(67.26%~88.69%),含有一个保守的活性区.构建原核表达载体p ET32-SsCu/Zn SOD在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,诱导出目的蛋白.转化菌的盐胁迫实验显示,其具有抗盐胁迫的功能.
关键词： SsCu/Zn超氧化物歧化酶基因 克隆 原核表达 盐胁迫
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乌桕硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶基因的克隆及表达
《西南农业学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶是植物脂肪酸合成代谢的关键酶,直接调节膜脂和贮脂中饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的比例。本研究通过RT-PCR及RACE技术,克隆乌桕硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶(SsSAD)的cDNA全长序列。结果显示,该序列包含1个1191 bp的完整的开放阅读框(GenBank登录号为EF079655),编码396个氨基酸,含33个氨基酸的叶绿体转移肽。其成熟肽含有363个氨基酸,推测其分子量为41.5 kDa,等电点为5.42。同源性分析及同源建模数据显示SsSAD和其它物种的SAD有较高的同源性,含有1个保守结构域。构建原核表达载体pMAL-SsSAD,转入大肠杆菌DH5α,并对诱导表达条件进行优化。
关键词： 乌桕 硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶 克隆 生物信息学分析 原核表达
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1A的克隆及生物信息学分析
《西南农业学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：以分离的3株苏云金芽孢杆菌质粒为模板,通过设计一对特异引物,PCR扩增得到3条全长3.6 kb的基因序列,其各自都包含一个完整的开放阅读框,编码序列全长分别是3468、3450、2697 bp(Genebank登录号分别为GQ385073,GQ385074,GQ385075);它们与cry1A类基因同源性都高达95%以上;分别编码1159、1150和902个氨基酸。并在此基础上采用生物信息学方法对这3个基因编码蛋白从氨基酸组成、理化性质、跨膜结构域、疏水性/亲水性、亚细胞定位、跨膜结构域以及功能域等方面进行了预测和分析。为转基因抗虫植物和微生物杀虫工程菌的构建提供了基因来源。
玉米Ubi-1启动子驱动挪威鼠热激蛋白4基因(Hspa4)植物表达载体的构建
《农业生物技术学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：挪威鼠热激70kD蛋白4(Rattus norvegicus heat shock protein4,Hspa4)是哺乳动物细胞内重要的一种分子伴侣,通过参与热激响应、未折叠蛋白应答等来保护机体免受损伤,在适应外界应答时是一种关键性的蛋白质(Kang et al.,2002;Zhao et al.,2007),有阻止蛋白质变性的功能。
关键词： 挪威鼠Hspa4基因 玉米Ubi-1启动子 克隆 植物表达载体
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拟南芥冷诱导CBF/DREB类结合因子的克隆及其生物信息学分析
《生物技术通报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：CBF/DREB结合因子广泛存在于植物中,主要参与诸如干旱、高盐以及冷胁迫等相关基因的表达调控。以拟南芥DNA为模板,PCR扩增出3个冷诱导的CBF/DREB结合因子,即CBF1、CBF2及CBF3,利用生物信息学手段对三者的cDNA序列、氨基酸序列的相似性、组成成分、理化性质、疏水性/亲水性、功能域、进化树、二级结构及DNA保守域的三级结构等进行了较为全面的分析。结果显示,CBF1、CBF2和CBF3的氨基酸序列同源性很高,达到91.4%,且都属于亲水性蛋白,三者在理化性质以及蛋白质二级结构乃至三级结构上也极为相似。另外,CBF1和CBF2都不具跨膜结构,CBF3含有1个跨膜螺旋。
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CBF3基因的克隆、生物信息学分析及植物表达载体的构建
《湖南农业科学 》 2009 CSCD
摘要：从拟南芥基因组DNA中分别克隆了CBF3基因和逆境诱导型启动子Rd29A,测序结果显示:克隆的CBF3基因长776bp,编码216个氨基酸,与GeneBank公布的的序列相比对,核苷酸同源性达到99.2%,并利用生物信息学手段对其氨基酸序列、进化树、理化性质、疏水性/亲水性等进行分析;启动子Rd29A全长为956 bp,与已报道的该启动子序列比较,其核苷酸同源性为99.5%。以双元载体pCAMBIA1301为基础,成功构建了植物表达载体pCAMBIA1301-Rd29A-CBF3,为利用CBF2基因提高植物的耐寒性创造了条件。
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冷相关转录因子CBF2基因的克隆及其植物表达载体的构建
《西南农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：从拟南芥Columbia基因组DNA中分别克隆了CBF2基因和低温诱导型启动子Rd29A。测序结果显示:克隆的CBF2基因长725 bp,编码216个氨基酸,与GeneBank公布的的序列相比对,核苷酸同源性为99.8%;启动子Rd29A全长为956 bp,与已报道的该启动子序列比较,其核苷酸同源性为99.5%。以双元载体pCAMBIA1301为基础,成功构建了植物表达载体pCAMBIA1301-Rd29A-CBF2,为利用CBF2基因提高植物的耐寒性创造了条件。
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