科研产出
甘薯块根储藏蛋白(Sporamin)启动子克隆及功能验证
《分子植物育种 》 2012 CSCD
摘要：提取甘薯"川薯34"总DNA,设计引物,通过高保真PCR扩增获得了长为1144bp的甘薯储藏蛋白(Sporamin)基因启动子SpoA-p。PLACE在线分析表明:Sporamin启动子具有基本的启动子元件CAAT-box,并包含大量与储藏蛋白表达相关、抗逆相关及蔗糖表达相关的功能组件。构建植物表达载体pBI-SpoA-p::GUS、农杆菌工程菌株EHA105:pBI-SpoA-p::GUS后导入烟草及甘薯,分别得到15株烟草和10株甘薯的阳性转基因植株,GUS染色分析表明烟草各部位中只在根中有基因表达,甘薯根、茎和叶各部位未检测到活性。5%蔗糖诱导处理24h后,在烟草根、茎及叶均观察到GUS活性;在甘薯中只有根有GUS活性。因此,可以看出此启动子为甘薯根部特异的表达启动子,并受蔗糖诱导而表达。
关键词： 甘薯 储藏蛋白基因 启动子 植物表达载体 蔗糖诱导 根部特异的表达
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玉米Ubi-1启动子驱动挪威鼠热激蛋白4基因(Hspa4)植物表达载体的构建
《农业生物技术学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：挪威鼠热激70kD蛋白4(Rattus norvegicus heat shock protein4,Hspa4)是哺乳动物细胞内重要的一种分子伴侣,通过参与热激响应、未折叠蛋白应答等来保护机体免受损伤,在适应外界应答时是一种关键性的蛋白质(Kang et al.,2002;Zhao et al.,2007),有阻止蛋白质变性的功能。
关键词： 挪威鼠Hspa4基因 玉米Ubi-1启动子 克隆 植物表达载体
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CBF3基因的克隆、生物信息学分析及植物表达载体的构建
《湖南农业科学 》 2009 CSCD
摘要：从拟南芥基因组DNA中分别克隆了CBF3基因和逆境诱导型启动子Rd29A,测序结果显示:克隆的CBF3基因长776bp,编码216个氨基酸,与GeneBank公布的的序列相比对,核苷酸同源性达到99.2%,并利用生物信息学手段对其氨基酸序列、进化树、理化性质、疏水性/亲水性等进行分析;启动子Rd29A全长为956 bp,与已报道的该启动子序列比较,其核苷酸同源性为99.5%。以双元载体pCAMBIA1301为基础,成功构建了植物表达载体pCAMBIA1301-Rd29A-CBF3,为利用CBF2基因提高植物的耐寒性创造了条件。
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冷相关转录因子CBF2基因的克隆及其植物表达载体的构建
《西南农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：从拟南芥Columbia基因组DNA中分别克隆了CBF2基因和低温诱导型启动子Rd29A。测序结果显示:克隆的CBF2基因长725 bp,编码216个氨基酸,与GeneBank公布的的序列相比对,核苷酸同源性为99.8%;启动子Rd29A全长为956 bp,与已报道的该启动子序列比较,其核苷酸同源性为99.5%。以双元载体pCAMBIA1301为基础,成功构建了植物表达载体pCAMBIA1301-Rd29A-CBF2,为利用CBF2基因提高植物的耐寒性创造了条件。
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单链抗体hs83基因植物表达载体的构建
《西南农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：成功构建了单链抗体hs83基因植物表达载体pCAMB IA1301-hs83。首先根据基因的序列重新设计了两条含有合适酶切位点的引物,酶切位点保证了基因能够插入取代pCAMB IA1301上GUS基因的第二外显子;第二步是PCR反应克隆目的基因,然后连接到pMD-18 T载体,进行测序鉴定;第三步是对pCAMB IA1301质粒和T-hs83质粒进行双酶切,释放出两个目的片段,分别回收后连接,酶切鉴定后将重组子通过冻融法转化根癌农杆菌EHA105,并用PCR法进行鉴定。
关键词： hs83基因 植物表达载体 pCAMBIA1301 PCR 农杆菌
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