科研产出
黄连种子内生细菌的分离鉴定及功能验证
《天然产物研究与开发 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：植物种子具有丰富的微生物资源，为深入挖掘黄连种子促生内生菌，本研究通过平板分离获得种子可培养内生菌，对获得的菌株进行溶磷、固氮、产铁载体和产IAA功能研究，筛选具有促生特性的菌株，结合种子萌发实验进行菌株促生功能验证，并对其进行分子生物学鉴定。结果表明，黄连种子可培养内生菌丰富，共分离得到内生菌57株，经16S rRNA鉴定出内生细菌29株，主要分布于芽孢杆菌属Bacillus、寡养假单孢杆菌属Stenotrophomonas、微杆菌属Microbacterium、无色杆菌属Achromobacter等13个属。优势菌为芽孢杆菌属（7株）和寡养假单孢杆菌属（7株）,分别占总鉴定菌株的24.14%。促生特性研究表明，具有溶磷功能菌株2株，固氮功能菌株9株产铁载体菌株2株，产IAA菌株6株，其IAA分泌量为64.52～203.57 mg/L。其中既具有溶磷功能又产IAA菌株1株，既溶磷又产铁载体菌株1株，既产铁载体又产IAA菌株1株。Priestia megaterium和A.spanius可显著提高黄连种子的发芽率。本研究将为揭示种子内生菌的促生机制和顽拗性种子后熟与萌发机制提供理论依据，同时也为微生物菌肥的开发奠定基础。
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附子白绢病拮抗细菌的分离鉴定及发酵条件优化
《南方农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】从黄粉甲中分离获得对附子白绢病病原菌具有较好抑制作用的拮抗细菌，为附子白绢病的生物防治提供菌种资源。【方法】以罹病黄粉甲为材料，通过稀释涂布法和平板对峙法分离并筛选对附子白绢病菌具有拮抗作用的细菌，通过形态结构、生理生化特征及16S r DNA序列分析等对拮抗细菌进行种类鉴定；以拮抗细菌发酵液在600 nm波长下的OD值为指标，采用单因素试验的方法对拮抗细菌的培养基组分以及发酵条件进行优化；通过室内盆栽试验明确拮抗细菌对附子白绢病的防治效果。【结果】采用稀释涂布法从罹病黄粉甲中分离获得4株细菌，经平板对峙法筛选获得对附子白绢病菌具有较好拮抗效果的菌株TS1，该菌对齐整小核菌菌丝生长的抑制率可达68.03%。根据菌株TS1的菌落形态结构、生理生化特征及16S r DNA序列分析结果，确定菌株TS1为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。菌株TS1的优化培养基配方：蛋白胨10.0 g/L、酵母浸粉5.0 g/L、麦芽糖15.0 g/L；最佳发酵条件：装液量30mL、初始接种量0.50%、转速210 r/min、培养温度42℃、初始pH 9、培养时间48 h。室内盆栽保护和治疗试验结果表明，菌株TS1对附子白绢病的平均防治效果分别为49.39%和62.97%。【结论】优化的发酵方案可用于快速、大批量培养菌株TS1菌悬液。菌株TS1对附子白绢病有较好的防治效果，具有开发成附子白绢病生防菌的潜力。
关键词： 黄粉甲 内生细菌 枯草芽孢杆菌 齐整小核菌 发酵条件 防治效果
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乌头产吲哚乙酸内生细菌遗传多样性、抗逆性及其对水稻幼苗生长的影响
《微生物学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[目的]探究乌头产吲咮乙酸(IAA)内生细菌的遗传多样性、溶磷解钾能力、抗逆能力及其对水稻幼苗生长的影响,为道地产区乌头产业可持续发展提供科技支撑.[方法]从健康乌头植株分离可培养内生细菌,采用Salkowski比色法测定内生细菌产IAA能力,16S rDNA限制性片段长度多样性(16S rDNA-RFLP)及16S rDNA全长序列研究其遗传多样性及系统发育地位,平板培养法测定产IAA内生细菌溶磷解钾及其对pH、温度、盐、抗生素等的耐受能力,平板法测定菌悬液浸泡后水稻种子萌发率和室内水培法探究产IAA内生细菌对水稻幼苗生长的影响.[结果]从健康乌头植株分离获得24株高产IAA的内生细菌,其分泌IAA的值为21.39-84.43 mg/L.16S rDNA-RFLP分析表明,24株产IAA的内生细菌可分为12个类群,代表菌株16S rRNA基因系统发育结果显示这些菌分属于肠杆菌属(Enterobacter)、克雷伯氏杆菌属(Klebsiella)、泛菌属(Pantoea)、假单胞菌属(Pseudomonas)、微杆菌属(Micrabacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、鞘氨醇杆菌属(Sphingobacterium)和金黄杆菌属(Chryseobacterium),表现出较丰富的遗传多样性.另外,24株菌中有12株菌具有较强的溶钾能力,大部分供试菌株可耐受较广范围的pH、温度和盐浓度,但对抗生素耐受性不强;10株内生细菌可显著提高水稻种子的萌发率,16株内生细菌可显著促进水稻幼苗的生长,综合筛选出3株内生细菌(JY1-1S、JY3-6S和JY10-1L)既能提高水稻种子发芽率,又能促进水稻幼苗生长.[结论]乌头植株含有较丰富的高产IAA的内生细菌资源,且其遗传多样性丰富;本研究筛选出3株对水稻种子萌发和幼苗生长具显著促进作用的内生细菌,可为后续生物肥料的开发提供优质菌种.
关键词： 乌头 内生细菌 IAA 遗传多样性 促生 溶磷解钾 抗逆性 水稻
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杉木内生细菌SM-1的鉴定及其对杉木赤枯病的防治效果
《福建农业学报 》 2021 CSCD
摘要：【目的】杉木赤枯病是杉木的重要病害之一,严重威胁杉木苗木生产及幼树成林。为了更好保护杉木,防治杉木赤枯病,从杉木叶片分离到内生细菌SM-1,探讨其对杉木赤枯病菌（Pestalotiopsis apiculatus）的拮抗作用。【方法】经形态观察、生理生化特性观察、16S rRNA及Biolog系统鉴定其种类;含毒平板及牛津杯法检测SM-1无菌发酵液对赤枯病菌的抑制率,并观察SM-1对赤枯病菌菌丝形态的影响;离体枝条的叶片接种试验检测SM-1无菌发酵液的防病效果。【结果】SM-1为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）,其无菌发酵液对赤枯病菌的抑制率可达58.80%;显微观察显示SM-1能够使赤枯病菌菌丝生长受到抑制,细胞膨大成球形;离体枝条的叶片接种试验揭示SM-1无菌发酵液对杉木赤枯病的抑制效率达95%,能够极显著减轻叶片发病程度（P<0.01）。【结论】杉木内生芽孢杆菌SM-1对杉木赤枯病具有良好的生物防治潜力。
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红地球葡萄健康叶片内生细菌多样性分析
《植物病理学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：本研究利用平板分离方法和变性凝胶梯度电泳(DGGE)技术,分析了北京、成都、合肥、武汉等4个地区的红地球葡萄在开花期、成熟期和衰老期健康叶片中内生细菌的群落结构。平板分离培养结果表明不同地区葡萄叶片中的内生细菌数量在8.0×10~3~2.8×10~4CFU·g~(-1)之间,其中武汉地区最高;不同生长时期葡萄叶片中的内生细菌数量在0.8×10~3~1.5×10~4CFU·g~(-1)之间,其中成熟期数量最大。扩增16S rRNA基因序列鉴定,分离获得的内生细菌属于芽胞杆菌属、泛菌属、短小杆菌属、假单胞菌属和葡萄球菌属,芽胞杆菌属为常见菌群。DGGE分析结果显示,同一地区和同一生长时期的样品间相似性较高;不同地区以成都地区的内生细菌种类最丰富;不同生长时期以成熟期种类最多。对特征条带回收测序,结果显示不可培养细菌和未确认的海洋浮游细菌在葡萄叶片中大量存在。
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高原作物青稞根及根际内生细菌群落结构的高通量分析
《作物杂志 》 2016 北大核心
摘要：利用高通量测序技术分析了西藏青稞主栽品种藏青2000根及根际内生细菌的16S V4变异区序列,同时应用Uparse RON、KA等软件整理和统计样品序列数和操作分类单元(OTU)数,分析物种丰度及Alpaha多样性等指标。获得的用于分析青稞根部内生细菌的有效序列和OTUs为55 192/3 613,用于分析青稞根际土壤内生细菌的有效序列和OTUs为62 181/4 399;根部及根际土壤Chao1指数分别为3 443.4290和4 632.5820,shannon多样性指数分别为8.542和9.967。在门水平对代表性OTU进行注释发现,青稞根及根际土壤内生细菌主要是变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)。在属水平上主要是假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)、土地杆菌属(Pedobacter)、黄杆菌属(Flavobacterium)、红游动菌属(Rhodoplanes)。结果显示,青稞根及根际内生细菌具有丰富的多样性,且二者的优势菌属一致。
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生姜内生溶磷细菌遗传多样性及溶解Al-P和Fe-P能力研究
《西南农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：开展生姜内生溶磷细菌的遗传多样性及溶磷能力研究,有助于获得新的溶磷微生物,促进土壤磷素转化。本文从采自重庆、四川雅安和眉山及贵阳等地生姜样品中分离得到32株内生溶磷细菌,采用BOX-PCR对其遗传多样性进行分析,进而研究供试菌株溶解Al-P和Fe-P的能力。BOX-PCR分析表明,供试菌株具有丰富的遗传带谱,聚类分析中,供试菌株在55%聚为一群;在70%的相似水平处,供试菌株分为6个BOX遗传群。在添加2 g/L Al-P和1 g/L Fe-P的液体培养基中,供试菌株溶解Fe-P能力高于溶解Al-P,有效磷含量分别为1.14~9.95和2.98~55.42μg/m L。其中,QW40溶磷效果最好,发酵液有效磷含量分别为9.95和55.42μg/m L。供试菌株对Al-P和Fe-P溶磷量与发酵液的p H值呈显著负相关关系。
关键词： 生姜 BOX-PCR 内生细菌 溶磷特性 遗传多样性
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铬污染区糙野青茅内生耐铬细菌筛选及其促生能力
《应用与环境生物学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：以铬污染区糙野青茅[Deyeuxia scabrescens(Griseb.)]为研究对象,从中分离耐重金属铬的内生菌,获得对重金属铬有强耐受性和具有促生功能的细菌,为微生物与植物联合修复重金属污染提供菌种资源.采用LB培养基,以涂布和撒接两种分离方法获得内生细菌,通过内生细菌在不同铬浓度培养基的生长状况来判断其对于重金属铬的耐受性,初筛耐受性强的菌株培养于含铬LB液体培养基培养后测定其OD值,以验证其对铬的耐受性.将耐铬能力突出的菌株接种于含铬LB液体培养基培养后测定培养基中的残留铬含量,初探其去铬能力,并分析耐铬菌株多样性和产吲哚乙酸IAA、产铁载体、溶磷、降解纤维素等促生能力.结果显示:从糙野青茅中共分离得到33株内生细菌,其中27株表现出较强的铬耐受性,5株细菌的铬耐受浓度高达1 000μg/m L.2株菌在铬浓度为300μg/m L的处理下培养48 h后去铬率分别为79.55%和75.27%.经16S rDNA序列测定,内生细菌属于Bacillus、Staphylococcus、Terribacillus、Ochrobacterium、Ignatzschineria、Alcaligenes 6个属.24株菌(88.89%)具有产IAA能力,18株菌(66.67%)具有产铁载体能力,10株菌(37.04%)具有溶磷能力,13株菌(48.15%)具有降解纤维素能力.本研究表明,铬污染区植物内生细菌在铬污染土壤的生物修复中具有很大潜力.
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四川松茸内生细菌群落结构与多样性
《应用生态学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了解松茸的内生细菌群落结构与多样性,以采自四川7个松茸主产区的14个松茸样品为材料,通过变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析其内生细菌的群落结构与多样性差异.结果表明:各个产区松茸样品的内生细菌群落结构与多样性存在明显差异.但采自相近地点、相似环境的松茸样品内生细菌群落结构相似性较高;样品的丰度范围为15~25,多样性指数依次为盐源>冕宁>会东>木里>雅江>盐边>小金;条带回收测序构建的系统发育树显示,松茸内生细菌种群丰富,各个产区松茸优势种群存在一定的差异,但假单胞菌属、爱文菌属、芽孢杆菌属在所有样品中均有分布,而且都占据一定的优势地位.产碱杆菌属与鞘氨醇杆菌属在大部分样品中为优势种群;而杜擀氏菌属、赖氨酸芽孢杆菌属在特定样品中为优势种群.表明松茸内生细菌具有丰富的多样性,研究结果可为筛选促进松茸生长的内生菌提供依据.
关键词： 松茸 内生细菌 群落结构 PCR-DGGE 促生细菌
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