科研产出
斯氏艾美耳球虫感染兔肠道菌群的变化分析
《中国养兔 》 2024
摘要：研究旨在分析斯氏艾美耳球虫感染兔肠道菌群的结构组成变化.选取12只雌性新西兰白兔,随机分为感染组(G3)和对照组(C3),G3兔灌胃感染1.0×105个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,C3兔灌胃等量生理盐水.在感染后第23天收集对照组和感染组兔小肠内容物,提取DNA,并对其进行16S rRNA测序及生物信息学分析.结果发现,对照组和感染组兔肠道菌群的Alpha多样性没有显著差异,而β多样性发生变化,表明两组的菌群结构不同.Metastats分析发现,与C3组相比,G3组兔肠道中拟杆菌属(Bacteroides),副杆菌属(Parabacteroides),罕见小球菌属(Subdoligranulum)以及具有抗炎作用的Lachno-clostridium属丰度显著升高(P<0.05);而类芽孢杆菌(Paenibacillus)(P<0.05)的丰度显著下降.同样,LEfSe分析中也发现拟杆菌的丰度明显升高(P<0.05).综上所述,斯氏艾美耳球虫感染兔肠道菌群的组成与对照组相比有明显的不同.
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斯氏艾美耳球虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白对兔的免疫保护效果评价
《畜牧兽医学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果，为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平，并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化；然后将42只45日龄无球虫幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEs-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白含1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1 mL 100μg rEs-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫。二免14 d后除空白对照组外，其余各组实验兔经口感染1×10~4个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊，攻虫后观察各组临床表现，每周定时采血、称重，感染21 d后剖检观察肝组织病理变化，并测定和统计每组的相对增重、料肉比、肝指数、卵囊排出量、生化指标、特异性IgG抗体以及细胞因子等。结果发现，Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫各个发育阶段均有转录，且转录水平存在差异，在孢子化卵囊阶段转录水平最高。免疫保护试验表明：感染后不免疫攻虫组出现兔肝球虫病典型症状，而rEs-GAPDH免疫组症状不明显。rEs-GAPDH免疫组的卵囊减少率达87.09%,相对增重率显著大于三个攻虫对照组(P<0.05),特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与不免疫攻虫组存在显著差异(P<0.05),组织病理切片也显示，免疫组相较不免疫攻虫组肝组织被破坏程度低，虫体数量较少。综上，斯氏艾美耳球虫重组蛋白rEs-GAPDH可减少增重损失和卵囊排出，能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答，具有一定免疫保护作用，可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。
关键词： 兔 斯氏艾美耳球虫 三磷酸甘油醛脱氢酶 重组蛋白 免疫保护
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兔斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫PCR检测靶标的筛选与单一、多重直接PCR检测方法的建立
《畜牧兽医学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：旨在建立快速、简便的兔斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫直接PCR检测方法。首先克隆斯氏艾美耳球虫线粒体基因组mtDNA和3种兔球虫顶质体基因rpoB,结合GenBank中收录的其它兔球虫的相关序列进行比对分析，然后以种间差异明显的序列为靶基因在其超变区设计多对特异性引物，同时对引物浓度等条件进行优化，并评价PCR方法的敏感性和特异性。本研究首次测定了斯氏艾美耳球虫线粒体基因组全序列和3种兔球虫顶质体基因rpoB的序列，斯氏艾美耳球虫mtDNA全长6 277 bp,包括3个蛋白质基因，与其它6种兔球虫mtDNA序列相似率为93.90%～97.45%;斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫顶质体基因rpoB大小在500 bp左右，三者相似性达93.93%～95.30%。靶基因筛选结果表明3种兔球虫ITS与其它基因（rpoB和mtDNA）相比较具有种内保守和种间差异大的特点，更适合用于分子诊断；基于3种兔球虫ITS序列的引物中，Ps1、Pi2、Pm2在单一或多重检测时均具有良好的特异性和敏感性。本试验通过对艾美耳球虫PCR检测候选基因靶标（ITS、mtDNA和rpoB）进行序列分析，筛选ITS为兔球虫种间差异明显的检测靶标基因，在此基础上建立的单一直接PCR方法和多重直接PCR方法具有特异、敏感、操作简便的优点，可用于3种兔球虫的流行病学调查或兔球虫病临床诊断。
关键词： 兔 斯氏艾美耳球虫 肠艾美耳球虫 大型艾美耳球虫 ITS 直接PCR
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斯氏艾美耳球虫泛素结合酶重组蛋白对家兔免疫保护效果的评价
《中国兽医科学 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：观察斯氏艾美耳球虫（Eimeria stiedai）重组蛋白r Es-UCE、r Es-EFG和r Es-DG32对家兔的免疫保护效果。利用相对荧光定量PCR分析Es-UCE、Es-EFG和Es-DG32 3个基因在虫体不同发育时期的转录水平并进行原核表达与蛋白纯化。在进行了3个重组蛋白对家兔的免疫保护效果初步试验后，筛选出r Es-UCE进行进一步评价，将42只45日龄无球虫家兔分为空白对照组、攻虫对照组、空载蛋白对照组、佐剂对照组和r Es-UCE免疫组，各组分别颈部皮下注射1 m L无菌PBS,1 m L无菌PBS,1 m L（2 mg/m L）皂素，1 m L（100μg/m L）Trx-His-S tag蛋白，1 m L（100μg/m L）r Es-UCE,14 d后同等剂量进行二免。二免后第14天攻虫，除空白对照组外每只无球虫兔经口感染1×104个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊。感染后定期观察各组兔的临床症状、称重并采血，感染后第21天剖检并收集直肠粪样，测定并统计各组兔的死亡率、卵囊排出量、相对增重率、料肉比、肝指数、血清种特异性抗体与细胞因子等。结果显示，试验各组均未出现死亡，r Es-UCE免疫组平均相对增重显著大于攻虫对照组（P＜0.05），肝指数显著低于攻虫对照组（P＜0.05）。r Es-UCE免疫组相对增重率达90.69%，卵囊减少率达78.81%，细胞因子（IL-2、IL-10、IL-17和IFN-γ）水平和特异性抗体水平均与对照组存在显著差异（P＜0.05）。结果表明，r Es-UCE可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。
关键词： 家兔 斯氏艾美耳球虫 泛素结合酶（UCE） 重组蛋白 免疫保护
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