文献类型： 中文期刊

作者： 郑若愚 ¹ ; 任永军 ² ; 肖洁 ¹ ; 白鑫 ¹ ; 蒲家艳 ¹ ; 陈浩 ¹ ; 杨光友 ¹ ;

作者机构： 1.四川农业大学动物医学院

2.四川省畜牧科学研究院

关键词： 兔;斯氏艾美耳球虫;三磷酸甘油醛脱氢酶;重组蛋白;免疫保护

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2023 年 06 期

页码： 2581-2595

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果，为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平，并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化；然后将42只45日龄无球虫幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEs-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白含1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1 mL 100μg rEs-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫。二免14 d后除空白对照组外，其余各组实验兔经口感染1×10~4个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊，攻虫后观察各组临床表现，每周定时采血、称重，感染21 d后剖检观察肝组织病理变化，并测定和统计每组的相对增重、料肉比、肝指数、卵囊排出量、生化指标、特异性IgG抗体以及细胞因子等。结果发现，Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫各个发育阶段均有转录，且转录水平存在差异，在孢子化卵囊阶段转录水平最高。免疫保护试验表明：感染后不免疫攻虫组出现兔肝球虫病典型症状，而rEs-GAPDH免疫组症状不明显。rEs-GAPDH免疫组的卵囊减少率达87.09%,相对增重率显著大于三个攻虫对照组(P<0.05),特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与不免疫攻虫组存在显著差异(P<0.05),组织病理切片也显示，免疫组相较不免疫攻虫组肝组织被破坏程度低，虫体数量较少。综上，斯氏艾美耳球虫重组蛋白rEs-GAPDH可减少增重损失和卵囊排出，能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答，具有一定免疫保护作用，可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。