科研产出
大型艾美耳球虫重组蛋白GAPDH对兔的免疫保护效果评价
《畜牧兽医学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：本研究旨在评价大型艾美耳球虫重组蛋白（rEm-GAPDH）对兔的免疫保护效果，为大型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。根据转录组数据筛选出Em-GAPDH基因，进行原核表达与蛋白纯化；将50只45日龄无球虫感染幼兔随机分为5组（空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEm-GAPDH免疫组）,分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白和1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1mL 100μg rEm-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫，二免14 d后每只兔经口感染1×10~5个大型艾美耳球虫孢子化卵囊，观察各组兔临床症状，每周固定时间采血和称重，感染14 d后宰杀剖检并测定和统计各组兔的卵囊排出量、相对增重、特异性IgG抗体和细胞因子等。结果成功表达了重组蛋白rEm-GAPDH,大小在59 ku左右，且大部分表达在包涵体。免疫保护试验表明：感染后不免疫攻虫组出现症状，而免疫组症状不明显。rEm-GAPDH免疫组的卵囊减少率达57.16%,相对增重率显著大于不免疫攻虫组（P＜0.05）,ACI值为144.96。特异性IgG抗体水平、细胞因子（IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β）水平均与对照组存在显著差异（P＜0.05）。大型艾美耳球虫重组蛋白rEm-GAPDH可以减少增重损失和卵囊排出，能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答，具有一定免疫保护作用，可以作为大型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。
关键词： 兔 大型艾美耳球虫 三磷酸甘油醛脱氢酶 重组蛋白 免疫保护
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斯氏艾美耳球虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白对兔的免疫保护效果评价
《畜牧兽医学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果，为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础。利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平，并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化；然后将42只45日龄无球虫幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEs-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100μg pET-32a空载蛋白含1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1 mL 100μg rEs-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫。二免14 d后除空白对照组外，其余各组实验兔经口感染1×10~4个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊，攻虫后观察各组临床表现，每周定时采血、称重，感染21 d后剖检观察肝组织病理变化，并测定和统计每组的相对增重、料肉比、肝指数、卵囊排出量、生化指标、特异性IgG抗体以及细胞因子等。结果发现，Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫各个发育阶段均有转录，且转录水平存在差异，在孢子化卵囊阶段转录水平最高。免疫保护试验表明：感染后不免疫攻虫组出现兔肝球虫病典型症状，而rEs-GAPDH免疫组症状不明显。rEs-GAPDH免疫组的卵囊减少率达87.09%,相对增重率显著大于三个攻虫对照组(P<0.05),特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与不免疫攻虫组存在显著差异(P<0.05),组织病理切片也显示，免疫组相较不免疫攻虫组肝组织被破坏程度低，虫体数量较少。综上，斯氏艾美耳球虫重组蛋白rEs-GAPDH可减少增重损失和卵囊排出，能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答，具有一定免疫保护作用，可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。
关键词： 兔 斯氏艾美耳球虫 三磷酸甘油醛脱氢酶 重组蛋白 免疫保护
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斯氏艾美耳球虫泛素结合酶重组蛋白对家兔免疫保护效果的评价
《中国兽医科学 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：观察斯氏艾美耳球虫（Eimeria stiedai）重组蛋白r Es-UCE、r Es-EFG和r Es-DG32对家兔的免疫保护效果。利用相对荧光定量PCR分析Es-UCE、Es-EFG和Es-DG32 3个基因在虫体不同发育时期的转录水平并进行原核表达与蛋白纯化。在进行了3个重组蛋白对家兔的免疫保护效果初步试验后，筛选出r Es-UCE进行进一步评价，将42只45日龄无球虫家兔分为空白对照组、攻虫对照组、空载蛋白对照组、佐剂对照组和r Es-UCE免疫组，各组分别颈部皮下注射1 m L无菌PBS,1 m L无菌PBS,1 m L（2 mg/m L）皂素，1 m L（100μg/m L）Trx-His-S tag蛋白，1 m L（100μg/m L）r Es-UCE,14 d后同等剂量进行二免。二免后第14天攻虫，除空白对照组外每只无球虫兔经口感染1×104个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊。感染后定期观察各组兔的临床症状、称重并采血，感染后第21天剖检并收集直肠粪样，测定并统计各组兔的死亡率、卵囊排出量、相对增重率、料肉比、肝指数、血清种特异性抗体与细胞因子等。结果显示，试验各组均未出现死亡，r Es-UCE免疫组平均相对增重显著大于攻虫对照组（P＜0.05），肝指数显著低于攻虫对照组（P＜0.05）。r Es-UCE免疫组相对增重率达90.69%，卵囊减少率达78.81%，细胞因子（IL-2、IL-10、IL-17和IFN-γ）水平和特异性抗体水平均与对照组存在显著差异（P＜0.05）。结果表明，r Es-UCE可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原。
关键词： 家兔 斯氏艾美耳球虫 泛素结合酶（UCE） 重组蛋白 免疫保护
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