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茶树基因组DNA提纯与RAPD反应系统建立

文献类型： 中文期刊

作者： 余桂容 1 ; 徐利远 1 ; 蔡平钟 1 ; 吴洁 1 ;

作者机构： 1.四川省农业科学院

关键词： 茶树;基因组DNA;提纯;RAPD;反应系统

期刊名称： 西南农业学报

ISSN： 1001-4829

年卷期： 2001 年 14 卷 01 期

页码： 99-101

收录情况： CSCD

摘要： DNA的提取质量是决定RAPD分析成功与否的关键。茶树幼嫩新梢中含有大量的茶多酚等次生物质 ,采用磨样时添加抗酚类氧化褐变的物质 ,在细胞核裂解之前去除细胞质中的茶多酚和蛋白质 ,而后再用改进的DNA微量快速提取法———SDS法分别从不同茶树品种新梢中提取和纯化基因组DNA ,所得到的DNA样品适宜于RAPD反应。通过对茶树RAPD分析中影响扩增结果的因素的研究 ,建立了茶树RAPD的最适反应系统 ,即在 2 5ul反应体系中 ,含 2 0 - 50ng模板DNA ,1 5mmol/lMgCl2 ,各 0 1mmol/lDNTPs ,0 2umol/L引物和 1UTaqDNA聚合酶 ;扩增程序为 :95℃预变性 30 0s ,94℃变性 6 0s,35℃退火 6 0s ,72℃延伸 12 0s ,共进行 4 0个循环 ,最后 72℃延伸 6 0 0s,这样可以取得较好的扩增效果

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