文献类型： 中文期刊

作者： 孟德飞 ¹ ; 张康友 ² ; 颜勇 ² ; 魏玲 ² ; 泽仁翁姆 ² ; 丁则德米 ² ; 黄建钧 ² ; 梅群弟 ¹ ; 张楠驰 ¹ ; 魏勇 ³ ; 王利 ¹ ;

作者机构： 1.西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室

2.甘孜州雅江县农牧农村和科技局

3.四川省畜牧科学研究院

关键词： 热休克蛋白B11;热应激;MDBK细胞;凋亡

期刊名称： 兽类学报

ISSN： 1000-1050

年卷期： 2024 年 44 卷 004 期

页码： 489-496

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 热休克蛋白B11 (Heat shock protein beta-11, HSPB11)是小热休克蛋白家族的成员之一，具有抗凋亡、促进细胞存活和维持细胞形态等功能。在热应激条件下，自噬失调是急性肾损伤、肾损伤修复不全及慢性肾脏疾病的发病机制之一，而肾细胞的基础自噬是维持肾脏稳态、结构和功能的关键。为探讨牦牛HSPB11对热应激牛肾细胞(Madin Darby Bovine Kidney, MDBK)活性和凋亡的作用，本研究将MDBK细胞分为对照组、热应激组和处理组，采用PCR扩增、生物信息学分析、原核表达载体构建、CCK-8法、吖啶橙染色法、荧光酶标仪检测、荧光定量PCR等方法。扩增得到牦牛HSPB11目的片段757 bp；构建的系统进化树显示，牦牛与黄牛HSPB11的相似性高达99%；成功构建p ET-32a-HSPB11重组质粒，表达获得约35 k Da的牦牛HSPB11；筛选得到牦牛HSPB11最佳浓度为10.0μg/m L，作为处理组HSPB11浓度。研究结果显示，对照组细胞相对活性极显著高于热应激组(P=0.004)，处理组细胞相对活性极显著高于热应激组(P <0.001)。热应激组细胞出现收缩、细胞核裂解呈现碎片状，处理组少见细胞裂解。此外，热应激组MDBK细胞核酸荧光强度均极显著高于对照组和处理组(P <0.001)。热应激组caspase-3、caspase-9、Bcl-2的m RNA表达量极显著高于对照组和处理组(P <0.001)。综上，推测牦牛HSPB11通过凋亡途径缓解热应激对MDBK细胞损伤，为探究牦牛HSPB11的功能提供基础资料。