牦牛热休克蛋白B11通过抗凋亡缓解热应激对肾细胞的体外损伤

孟德飞; 张康友; 颜勇; 魏玲; 泽仁翁姆; 丁则德米; 黄建钧; 梅群弟; 张楠驰; 魏勇; 王利; 《兽类学报 》 2024 北大核心 CSCD

摘要：热休克蛋白B11 (Heat shock protein beta-11, HSPB11)是小热休克蛋白家族的成员之一，具有抗凋亡、促进细胞存活和维持细胞形态等功能。在热应激条件下，自噬失调是急性肾损伤、肾损伤修复不全及慢性肾脏疾病的发病机制之一，而肾细胞的基础自噬是维持肾脏稳态、结构和功能的关键。为探讨牦牛HSPB11对热应激牛肾细胞(Madin Darby Bovine Kidney, MDBK)活性和凋亡的作用，本研究将MDBK细胞分为对照组、热应激组和处理组，采用PCR扩增、生物信息学分析、原核表达载体构建、CCK-8法、吖啶橙染色法、荧光酶标仪检测、荧光定量PCR等方法。扩增得到牦牛HSPB11目的片段757 bp；构建的系统进化树显示，牦牛与黄牛HSPB11的相似性高达99%；成功构建p ET-32a-HSPB11重组质粒，表达获得约35 k Da的牦牛HSPB11；筛选得到牦牛HSPB11最佳浓度为10.0μg/m L，作为处理组HSPB11浓度。研究结果显示，对照组细胞相对活性极显著高于热应激组(P=0.004)，处理组细胞相对活性极显著高于热应激组(P <0.001)。热应激组细胞出现收缩、细胞核裂解呈现碎片状，处理组少见细胞裂解。此外，热应激组MDBK细胞核酸荧光强度均极显著高于对照组和处理组(P <0.001)。热应激组caspase-3、caspase-9、Bcl-2的m RNA表达量极显著高于对照组和处理组(P <0.001)。综上，推测牦牛HSPB11通过凋亡途径缓解热应激对MDBK细胞损伤，为探究牦牛HSPB11的功能提供基础资料。

关键词： 热休克蛋白B11 热应激 MDBK细胞 凋亡