科研产出
越西县苹果黑星病菌鉴定、生物学特性及田间防效研究
《中国农学通报 》 2025 CSCD
摘要：为明确越西县苹果黑星病病原菌的种类、生物学特性及防治药剂，通过分子生物学和形态学特征进行分析，结合不同培养基、pH、碳源及氮源等对苹果黑星病菌生物学特性进行研究，并以5种常用杀菌剂进行田间防效研究。研究表明，引起越西县苹果黑星病的病原菌为Venturia inaequalis。病菌的最佳培养基为麦麸皮琼脂培养基，最佳pH 7～8，最佳碳源为葡萄糖，最佳氮源为蛋白胨。田间防治效果表明，5种杀菌剂均能有效防治苹果黑星病，其中20%氟唑菌酰羟胺防治效果最好，防效为89.54%，防治效果依次是20%氟唑菌酰羟胺SC>20%氟酰羟·苯甲唑SC>40%氟硅唑EC>50%醚菌酯WG>36%甲基硫菌灵SC,20%氟唑菌酰羟胺、20%氟酰羟·苯甲唑、40%氟硅唑3种药剂可作为苹果黑星病田间防治参考用药。
关键词： 越西县 苹果黑星病 鉴定 生物学特性 田间防治 防治效果 杀菌剂
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黄肉猕猴桃‘金实4号’果实采后蒂腐病病原菌的分离及鉴定
《北方园艺 》 2024 北大核心
摘要：以猕猴桃新品种'金实4号'采后病果为试材,取果实果蒂病组织分离腐烂病病原菌,按照柯赫氏法则确定分离病株的致病性,同时采用形态学结合分子生物学鉴定技术对病原菌种类进行鉴定,明确黄肉猕猴桃果实采后贮藏期引起腐烂的病菌种类,以期为黄肉猕猴桃采后腐烂病防治研究提供参考依据.结果表明:共有8种软腐病病原菌被鉴定,分别是拟茎点霉菌(Phomopsis sp.)、间座壳菌(Diaporthe cotoneastri)、小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspora)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、新壳梭孢(Neofusicoccum parvum)、链格孢(Alternaria sp.)、镰刀菌(Fusarium sp.)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea).
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猪链球菌3型的分离鉴定及耐药性分析
《黑龙江畜牧兽医 》 2024 北大核心
摘要：为查明四川地区某规模化猪场猪发病死亡原因并进行有效防控，试验采集病死猪肺脏组织样本4份进行细菌的分离，并对分离菌株进行菌落形态观察、革兰氏染色和镜检、猪链球菌的PCR鉴定、血清型鉴定、主要毒力基因检测、药敏试验和耐药基因检测。结果表明：从病料中共分离到4株菌，4株分离菌株在胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)中均呈灰白色、针尖状、圆形的菌落，革兰氏染色后镜检可见呈蓝紫色、圆形或卵圆形、链状排列的革兰氏阳性菌，符合猪链球菌的形态特征，分别命名为SYS9、SYS14、SYS15和SYS16。经猪链球菌的PCR鉴定和血清型鉴定确定4株分离菌株均为猪链球菌3型。4株猪链球菌分为2种毒力基因型，SYS9株的毒力基因型为mrp+epf+sly+fbps+cps-orf2+,SYS14、SYS15和SYS16的毒力基因型为mrp+epf+sly+fbps+cps+orf2+;4株猪链球菌均对四环素和泰乐菌素耐药，且均对阿莫西林(青霉素类药物),氟苯尼考和氯霉素(酰胺醇类药物),利奈唑胺(口恶唑烷酮类药物),头孢匹罗、头孢氨苄和头孢拉定(头孢菌素类药物),环丙沙星和左氟沙星(喹诺酮类药物)敏感。除SYS9株仅对四环素和泰乐菌素耐药外，其余3株菌均为3重或3重以上耐药菌株，其中SYS15株为6重耐药菌株。4株猪链球菌均未检出耐药基因ermA、mefA、msrD、fexA、fexB、aph(3′)-Ⅲa、ant(6′)-Ⅰa、aph(2′)-Ⅰb; SYS9株检出耐药基因tetO和ermB,SYS14株检出耐药基因tetM、tetO、ermB、aac(6′)-aph(2″)和optrA,SYS15株检出耐药基因tetM、tetO、tetL、ermB、aac(6′)-aph(2″)和optrA,SYS16株检出耐药基因tetM、tetO、tetL、ermB、aac(6′)-aph(2″)、optrA和Lsa(E)。说明该规模化猪场猪发病死亡原因为猪链球菌3型感染，可使用青霉素类、酰胺醇类、口恶唑烷酮类、头孢菌素类、喹诺酮类药物进行治疗。
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猪流行性腹泻病毒CH/SCJY/2022株的分离鉴定及遗传进化分析
《黑龙江畜牧兽医 》 2024 北大核心
摘要：2022年四川省简阳地区某规模化猪场仔猪发生严重腹泻甚至死亡，疑似猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）感染。为确定病原并了解其遗传进化特征，试验无菌采集病死腹泻仔猪小肠组织样本，提取RNA后采用RT-PCR方法对病原进行检测，并对病毒进行分离和半数组织培养感染剂量(TCID50)测定、间接免疫荧光试验、全基因组测序和遗传进化分析。结果表明：腹泻仔猪小肠组织样本为PEDV阳性，小肠组织过滤上清液接种Vero细胞盲传至第3代出现致细胞病变效应（cytopathic effect, CPE）,盲传至第9代时出现稳定的CPE,第9代病毒液的TCID50为1×10-5.2/0.1 mL;在以鼠源抗PEDV-S蛋白单克隆抗体为一抗、FITC标记的羊抗鼠IgG为二抗的间接免疫荧光试验中，接种分离毒株的Vero细胞呈现特异性绿色荧光，未接种分离毒株的Vero细胞无特异性绿色荧光。将分离毒株命名为CH/SCJY/2022。经PCR分段扩增、测序、拼接后得到CH/SCJY/2022株全基因组序列，大小为28 038 bp。CH/SCJY/2022株S基因、ORF3基因、M基因、N基因与参考毒株（CV777、AJ1102、LW/L、virulent DR13、LZC）核苷酸相似性分别为93.11%～97.71%、95.41%～98.37%、96.62%～98.09%、94.72%～96.38%。CH/SCJY/2022株全基因组序列与30株PEDV参考毒株核苷酸相似性为96.0%～98.9%,其中与强毒变异株YC2014的相似性最高（98.9%）,与韩国毒株SM98的相似性最低（96.0%）,与疫苗毒株CV777、AJ1102的相似性分别为96.4%和98.3%。基于全基因组序列构建的遗传进化树中可见CH/SCJY/2022株与CH/SCZY103/2017位于同一小分支，亲缘关系最近，属于GⅡb基因亚群；与疫苗毒株LW/L、AJ1102、XJ-DB2、CV777、attenuated DR13的亲缘关系较远。与参考毒株（attenuated DR13、LW/L、CV777、AJ1102、XJ-DB2）相比，CH/SCJY/2022株S蛋白氨基酸序列存在6处特有的氨基酸位点突变，分别为N139D、I289M、R492K、F541L、L1000M、S1080L。说明试验成功从该养猪场腹泻仔猪小肠组织样本中分离鉴定到1株PEDV GⅡb亚群变异株，并获得了该毒株的全基因组序列，具有独特的分子特征。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 全基因组测序 同源性分析 遗传进化分析 分离 鉴定
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基于CO Ⅰ基因的酸模角胫叶甲DNA条形码研究
《中国植保导刊 》 2023 北大核心
摘要：经调查,一种叶甲在四川省阿坝藏族羌族自治州药用植物唐古特大黄上大量发生为害,严重影响当地大黄产业.从受害株上采集卵、幼虫、成虫样品,进行形态学鉴定,并对样品的线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因进行PCR扩增和测序,获得该虫不同发育阶段的COⅠ基因序列,与数据库中酸模角胫叶甲(Gastrophysa atrocyanea)COⅠ基因比较,相似性达98.54%~99.81%,再利用K2P模型构建NJ系统进化树,确定遗传关系.结果显示,这种为害唐古特大黄的叶甲即酸模角胫叶甲.本研究使用的基于CO Ⅰ基因的DNA条形码技术可实现对该虫不同发育阶段(卵、幼虫、成虫)快速而准确的鉴定,从而为及时开展防治提供依据.
关键词： 酸模角胫叶甲 唐古特大黄 DNA条形码 鉴定 CO Ⅰ
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西藏土壤芽孢杆菌的分离鉴定及生防促生菌筛选
《江苏农业科学 》 2023 北大核心
摘要：青稞是西藏人民的主要粮食作物，在种植生长过程中有多种病害对其产生危害，直接影响青稞的产量和质量。本研究针对如何绿色防治西藏青稞网斑病立题，以期找到对某一种或几种青稞病害高效的生防菌株，为青稞网斑病防治及生产实际提供材料。采集林芝市鲁朗镇扎西岗村的青稞网斑病植株活体样本，采用组织分离法和离体培养法获得青稞网斑菌菌株XZQKWB。从西藏自治区不同采样点采集根际土壤，采用温度筛选法和平板涂布法分离得到11 718株芽孢杆菌。以分离得到的芽孢杆菌为材料，以6种病原菌为靶标，共筛选得到14株对6种病原菌均具有不同程度的抑制效果的芽孢杆菌：91-5、92-1、92-10、92-3、27-36、32-69、94-19、44-36、5-142、58-59、58-7、59-60、63-35和66-53。结合形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列分析，初步鉴定58-7、59-60、27-36、63-35、44-36、58-59和66-53为阿氏芽孢杆菌（Priestia aryabhattai）;菌株94-19和32-69为沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis）;菌株92-10和92-3为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）;菌株91-5为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）;菌株92-1和5-142为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对14株菌进行生防盆栽和促生盆栽试验，结果表明菌株92-10兼具溶无机磷能力、解钾能力、固氮能力等促生特性，对藏青2000种子的根长、芽长、株高、地上部鲜质量都有明显的促生效果，在平皿对峙试验中对6个病原菌的抑制率均达到50%以上，在青稞网斑病的盆栽防治试验中防效达到76.5%。
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一种大蒜叶枯病新病原菌鉴定与药剂敏感性测定
《西南农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：[目的]探究引起大蒜叶枯的一种新病原菌及其对杀菌剂的敏感性,为生产上大蒜叶枯病防治提供科学依据.[方法]采用常规组织分离方法获得病原菌菌株,通过病原菌形态特征、致病性测定及分子生物学技术对菌株进行鉴定,并采用菌丝生长速率法研究菌丝生物学特性,测定病菌对杀菌剂的敏感性.[结果]依据菌株的形态学和分子生物学特征,确定引起大蒜叶枯的一种新病原菌为球毛壳菌(Chaetomium globosum).该病菌菌丝生长最佳培养基为玉米培养基,最佳碳源为D-果糖,最佳氮源为酵母浸粉,适宜pH为7.0.菌丝生长对质量浓度分别为2400 mg/L的72%甲霜·锰锌可湿性粉剂、700 mg/L的70%甲基硫菌灵可湿性粉剂、330 mg/L的500 g/L戊唑多菌灵悬浮剂、830 mg/L的50%腐霉利可湿性粉剂、300 mg/L的45%咪鲜胺微乳剂和600 mg/L的60%唑醚·代森联水分散粒剂均极为敏感;唑醚·代森联、苯甲·嘧菌酯、代森锌、甲霜·锰锌和丙森锌对该病菌菌丝EC50分别为0.0053、0.1792、0.5162、3.0539和4.2175 mg/L.[结论]球毛壳菌是引起大蒜叶枯的新病原真菌,可侵染大蒜叶片,造成叶片枯黄,病害定名为大蒜球毛壳型叶枯病;测定出该病原菌对6种供试杀菌剂高度敏感,唑醚·代森联、苯甲·嘧菌酯和代森锌对该病原菌毒力高,可作为生产上防治大蒜球毛壳型叶枯病害的药剂.
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一株除臭细菌的筛选及鉴定
《安徽农业科学 》 2023
摘要：[目的]筛选获得分类地位明确、具有较好除臭效果的微生物菌株。[方法]通过平板涂布法从鸡粪发酵料中筛选具有除臭效果的菌株，并检测各菌株对鸡粪中氨气和硫化氢的降解率。通过表型特征、生理生化特征和遗传特征等多相分析来确定目的菌株的分类地位。[结果]筛选获得一株除臭细菌3-1,对氨气和硫化氢的降解率分别达到了63.08%和62.80%。鉴定结果表明，细菌3-1为原磷谷氨酸杆菌（Glutamicibacter protophormiae）,在GenBank核酸登录号为OM816730。[结论]菌株3-1在无害化处理畜禽粪污方面具有一定的应用前景。
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四川部分地区猪链球菌的分离鉴定及其毒力基因型和耐药性研究
《黑龙江畜牧兽医 》 2023 北大核心
摘要：为了解四川地区猪链球菌流行毒株的血清型、毒力基因型及耐药情况,试验采集 2021-2022年四川部分地区生猪养殖场死亡猪肺脏组织151 份,对疑似猪链球菌的菌株进行分离与鉴定,并对分离到的猪链球菌菌株进行血清型鉴定,对可定型猪链球菌菌株进行毒力因子(sly、mrp、epf)检测和药敏试验.结果表明:151 份肺脏组织样品中,共分离鉴定出猪链球菌 32 株;在分离到的 32 株猪链球菌菌株中,可定型菌株有24 株,分属于8 种血清型.其中血清 16 型有 10 株,占比 31.2%,为优势血清型;血清2 型有7 株,占比21.9%;血清9 型有2 株,占比 6.3%;血清 1 型、4 型、5 型、7 型、30 型各有1 株,均占比3.1%.未定型菌株有8 株,占比 25.0%.24 株可定型菌株共检出 5 种毒力基因型,分别为sly+mrp-epf-(11/24)、sly+mrp+epf+(1/24)、sly-mrp-epf-(8/24)、sly-mrp+epf+(1/24)、sly+ mrp+epf-(3/24),其中优势毒力基因型为sly+mrp-epf-.24 株猪链球菌对林可霉素的耐药率最高,为100%;其次是克林霉素和氟苯尼考(均为 91.7%);对头孢匹罗的耐药率最低(37.5%).24 株猪链球菌整体耐药情况严重,其中 20 株菌株表现为多重耐药,占比 83.3%;1 株菌株为 8 耐,即对本试验中的8 类抗生素均耐药.说明四川地区猪链球菌存在多种血清型,其中 16 型、2 型为主要血清型,sly+mrp-epf-为优势毒力基因型,整体耐药情况严重,且绝大多数菌株属于多重耐药菌株.
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四川省马铃薯孢囊线虫的形态和分子鉴定
《福建农业学报 》 2022 CSCD
摘要：[目的] 四川省越西县马铃薯发现疑似线虫侵染症状,为查清病原,对分离获得的线虫进行形态学和分子生物学鉴定.[方法] 采集马铃薯根系和根围土壤,对根系内部线虫进行染色观察,用简易漂浮法分离孢囊,并对发现的二龄幼虫、雌虫和孢囊进行显微摄影和形态学测计.提取孢囊和二龄幼虫的DNA,用种特异PCR方法进行鉴定,同时PCR扩增后获得核糖体rDNA部分18S基因、28S基因D2~D3区和ITS区DNA序列,在GenBank中下载已登录的各近似种(球孢囊线虫属)的部分序列,进行序列比对,并使用MrBayes 3.2.3软件进行贝叶斯法系统进化树的构建.[结果] 该种线虫能入侵寄主根系内部,二龄幼虫口针基部球近圆形,向后倾斜;口针平均长<23 μm;孢囊Granek比值≥3,与马铃薯金线虫高度一致.特异PCR扩增3个孢囊和4条二龄幼虫均得到了430 bp左右的明亮条带,进一步测序后得到的序列长度均为434 bp,与马铃薯金线虫一致.核糖体rDNA 18S和28S进化分析表明,该四川越西马铃薯上发现的孢囊线虫属于球孢囊属线虫,核糖体ITS基因序列进一步分析证实该群体确为马铃薯金线虫.[结论] 四川省越西县马铃薯根系分离获得的线虫为马铃薯金线虫,该线虫为我国内检和外检均十分关注的检疫性线虫,一旦传入和定殖扩散,根除十分困难.建议尽快建立马铃薯金线虫疫情监测体系,加强马铃薯种薯的检疫监督管理,增加马铃薯金线虫防控技术的研发投入、研发检测和防控技术,为我国马铃薯主粮化产业健康可持续发展保驾护航.
关键词： 马铃薯孢囊线虫 形态学 分子生物学 检疫 鉴定 监测
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