科研产出
15株四川地区猪圆环病毒3型全基因序列的克隆与分析
《中国动物传染病学报 》 2025
摘要：为了解四川省地区猪圆环病毒3型(PCV3)流行毒株的分子及遗传变异规律，试验采用生物学软件，设计3对特异性引物对从四川地区部分养殖场猪群中收集的15份PCV3阳性样品进行分段扩增、全基因序列遗传变异分析。结果表明：PCR分段扩增分别得到大小为623、803和753 bp的条带，阳性克隆菌测序结果与GenBank中PCV3的同源性均大于98.6%；15株样品毒株的全基因核苷酸序列的同源性为98.1%～99.8%，推导氨基酸序列的同源性为95.8%～99.2%，由Cap基因的遗传进化分析发现从四川地区获取的15株PCV3毒株属于3a和3b两个亚群。说明四川地区流行的PCV3毒株至少存在3a和3b 2个亚群，该亚群的变异程度低、较为保守。
关键词： 猪圆环病毒3型(PCV3) 序列分析 遗传变异 流行病学
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一例鸡马立克氏病的诊断及其病毒Meq基因序列分析
《中国畜禽种业 》 2023
摘要：为确定四川省乐山市某蛋鸡场病鸡的发病原因,该试验采用临床剖检、PCR方法对发病鸡进行诊断,并对病毒Meq基因全序列进行PCR扩增、测序和序列分析.剖检结果为病鸡心脏、肝脏和脾脏表面均有白色结节,PCR鉴定结果为马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)阳性.MDV Meq基因全序列长度均为1020bp,核苷酸和氨基酸同源性分别为99.6%~99.9%和98.8%~100%,与MDV参考序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.4%~99.8%和95.9%~99.4%.4个Meq测序序列存在4个新的氨基酸突变位点,均具有D80Y、V115A、T139A、P176R和P217A氨基酸突变位点,符合MDV强毒株的序列特征.系统发育树显示4株乐山市分离毒株测序序列与近年国内大部分参考毒株聚在同一分支上,亲缘关系较近,未形成明显的地理分支,乐山MDV样品132bp重复序列的拷贝数及Meq基因的变异均符合MDV强毒株的序列特征,且存在新的氨基酸突变.
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柑橘类枯草杆菌蛋白酶基因CcSubtilisin的克隆及遗传转化
《西南大学学报(自然科学版) 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：以克里曼丁橘[Citrus clementina]叶片RNA为材料,采用RT-PCR技术克隆获得了一个编码类枯草杆菌蛋白酶的基因,命名为CcSubtilisin.该基因的开放阅读框(ORF)长度为2 337bp,预测可编码778个氨基酸残基的多肽.分析发现CcSubtilisin与拟南芥、蓖麻、番茄、毛果杨、大豆、挪威云杉、欧洲桤木、百合等18个物种的同源蛋白具有相同的4个保守区域,属于枯草杆菌蛋白酶.通过构建该基因的超表达载体并以沙田柚为材料进行遗传转化,获得了该基因的9个转基因沙田柚株系.实时定量PCR结果表明,4个用于检测的株系中有3株的表达量明显高于对照.
关键词： 丝氨酸蛋白酶 枯草杆菌蛋白酶 基因克隆 序列分析 遗传转化
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家蚕淀粉酶基因(Bmamy2)的分子克隆及表达特征和序列分析
《蚕业科学 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：淀粉酶在生物体内的碳水化合物代谢中起重要作用。根据预测的基因序列设计引物,克隆了一个家蚕淀粉酶基因(Bmamy2),获得完整的编码区序列(全长1 752 bp,编码583个aa)。用推导的氨基酸序列与其它物种的淀粉酶基因作相似性比较和系统发育分析,发现所克隆的Bmamy2基因是一个起源很早的拷贝,在细菌、果蝇、非洲蟾蜍、人和鸡等多种生物中存在与之同源的基因。该基因编码蛋白的功能结构域预测有2个起催化作用的关键氨基酸发生突变,推测该基因可能失去了催化水解碳水化合物的功能。RT-PCR和基因芯片检测结果表明,该基因在家蚕5龄第3天幼虫的中肠和脂肪体中表达,且在中肠中的表达丰度较高。
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苏云金芽孢杆菌猝倒亚种Cry1 Aa13基因的克隆及序列分析
《四川大学学报(自然科学版) 》 2004 北大核心 CSCD
摘要：根据GenBank中Cry1A类基因序列设计一对特异性引物,以苏云金芽孢杆菌猝倒亚种质粒DNA为模板,应用PCR扩增技术得到一大小约为3.6kb的DNA片段(Cry1Aa13).通过引物步行法测定该片段长3598bp,其中开放阅读框(ORF)长3540bp,编码1180个氨基酸,分子量为133.49kD,等电点pI=5.0.序列比较表明该基因与Cry1Aa类基因高度同源(达95%以上),该基因已在GenBank中登录,登录号为AF510713,并被Btδ 内毒素基因国际命名委员会正式命名为Cry1Aa13.
关键词： 苏云金芽孢杆菌猝倒亚种 Cry1Aa13 PCR 克隆 序列分析
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家蚕核型多角体病毒山东株p35基因的克隆及序列分析
《遗传 》 2003 北大核心 CSCD
摘要：根据家蚕核型多角体病毒T3株p35基因非编码区序列设计一对特异性引物,应用PCR技术从家蚕核型多角体病毒山东株中扩增得到一条1080bp的片段。测序结果表明,该片段含有p35基因,开放阅读框长900bp,编码299个氨基酸,分子量为34.91kDa,pI=6.4。序列分析表明,BmNPV山东株的p35基因与T3株存在差异。
关键词： 家蚕核型多角体病毒山东株 p35基因 克隆 序列分析
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苏云金杆菌以色列亚种几丁质酶基因的克隆及序列分析
《遗传学报 》 2003 SCI 北大核心 CSCD
摘要：从苏云金芽孢杆菌以色列亚种 (Bacillusthuringiensissubspisraelensis)中提取基因组DNA ,通过合成 1对特异性引物 ,用touchdownPCR的方法扩增几丁质酶ichi基因序列 (GenBank登录号 :AF5 2 6 379)。ichi序列全长为 2 5 70bp ,含有 1个 2 0 6 7bp的开放阅读框 (ORF) ,编码 6 88个氨基酸 ,推测分子量为 75 79kDa ,等电点pI=5 90的几丁质酶前体。序列和结构比较分析表明 :Ichi氨基酸序列与蜡状芽孢杆菌 (Bacilluscereus) 2 8 9几丁质酶CW、蜡状芽孢杆菌CH几丁质酶B及苏云金芽孢杆菌墨西哥亚种几丁质酶的同源性分别为 97 2 4 %、97 18%、97 6 3% ,而与苏云金芽孢杆菌巴基斯坦亚种的同源性只有 6 3 0 7%。Ichi编码区由分泌信号肽 (46AA)、催化区 (10 5AA)、粘蛋白Ⅲ型同源区 (74AA)及几丁质结合区 (40AA)组成。
关键词： 苏云金芽孢杆菌以色列亚种 几丁质酶基因 克隆 序列分析
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家蚕核型多角体病毒埃及株p10基因的克隆及结构特征分析
《农业生物技术学报 》 2003 CSCD
摘要：根据BmNPVT3株中p10基因侧翼保守序列设计一对特异性引物,以家蚕核型多角体病毒埃及株(Bombyxmori nuclearpolyhedrosisvirusstrainEgyptian,BmNPVEg)基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增得到p10基因(GenBank登录号:AF533970)。扩增片段全长为877bp,含有1个213bp的开放阅读框(ORF)、编码70个氨基酸,推测其分子量为7.5kD。序列分析表明:与苜蓿银纹夜蛾(Autographacalifornica)核型多角体病毒(AcMNPV)p10基因及张耀洲得到的BmNPVp10基因相比,BmNPV埃及株及BmNPVT3株的p10基因由于在ORF的第209nt后缺失了1个dATP,从而导致他们的编码区减少了24个氨基酸残基。与BmNPVT3p10相比,BmNPVEgp10又缺失了终止密码子TAA后66~67nt的1个10bp的序列,其中包括poly(A)信号序列。
关键词： 家蚕核型多角体病毒 埃及株 p10基因 PCR 序列分析
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