科研产出
大肠杆菌多酚氧化酶的分子克隆及异源高效表达
《中国饲料 》 2024 北大核心
摘要：菜籽粕、棉籽粕等非粮饲料资源存在的酚类化合物芥子碱、棉酚等抗营养因子，严重影响了其饲喂价值。本课题组筛选出的一株大肠杆菌属芥子碱降解菌SDB2已被证实能通过分泌多酚氧化酶来降解芥子碱和棉酚，本试验旨在运用基因工程技术克隆SDB2多酚氧化酶基因，实现其高效表达，为SDB2多酚氧化酶在饲料工业上的规模化应用奠定基础。从大肠杆菌SDB2中克隆出多酚氧化酶基因，将其与质粒pET28a连接后转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中培养，通过PCR鉴定及质粒酶切验证方法构建重组菌株，同时对重组克隆基因进行生物信息学分析。采用“2×2”交叉试验设计，以温度和诱导剂IPTG浓度两个影响因素诱导SDB2多酚氧化酶基因在重组菌株中高效表达，经SDS-PAGE和WB双重验证后，确立最佳诱导条件，最终纯化出目标酶蛋白。结果表明：（1）成功克隆SDB2多酚氧化酶基因，构建出异源表达重组菌株。（2）克隆出的SDB2重组多酚氧化酶基因含目标核苷酸741个，总编码氨基酸263个（含标签氨基酸20个），氨基酸组成的蛋白相对分子质量为28499.0，理论等电点为6.94，据此预测出SDB2重组多酚氧化酶三维结构模型。（3）确立SDB2多酚氧化酶异源高效表达的最佳诱导条件为温度37℃，IPTG浓度1 mmol，该条件下表达出大量可溶性酶蛋白，有利于工业化生产。本试验条件下，大肠杆菌SDB2多酚氧化酶成功实现了分子克隆及异源高效表达，为我国非粮饲料资源实现高效利用提供了技术参考。
全文链接
请求原文
微波杀青对桑叶多酚氧化酶活性的影响
《四川蚕业 》 2022
摘要：杀青是桑叶茶制作工序中最关键的工序，对桑茶品质起着决定性作用。利用微波杀青对桑叶进行处理，探讨桑叶投放量、微波输出功率、杀青时间对桑叶中多酚氧化酶活性的影响。结果表明，三个因素均对桑叶中多酚氧化酶活性有显著影响，且影响大小依次为投放量＞输出功率＞杀青时间，经正交试验得出微波杀青的最优组合为桑叶投放量30 g、杀青时间150s和微波输出功率900 W，此时多酚氧化酶活性最低为373 U，其活性丧失了81%，具有较好的杀青效果。
全文链接
请求原文
芥子碱和硫酸铜对芥子碱降解菌酶活力的影响
《西南农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：【目的】本试验通过研究芥子碱、硫酸铜以及培养时间对芥子碱降解菌1(Sinapine-degrading Bacteria 1, SDB1)相关酶活力的影响,旨在探索SDB1中参与芥子碱降解的酶类以及影响酶活的因素。【方法】把30个SDB1的基础平板培养基平均分成1个对照组和4个处理组,每组6个重复。对照组除基础培养基外不再添加其他成分;处理1组和处理2组分别在基础培养基中添加0.40和0.80 g/L的芥子碱;处理3组和处理4组分别在基础培养基中添加1.00和3.00 mmol/L的硫酸铜。收集培养液,测定培养2、4、6、8 d后菌液中淀粉酶、多酚氧化酶、β-葡萄糖苷酶、漆酶、乙酰胆碱酯酶和脂肪酶的活力。【结果】①从对照组的结果看,SDB1具有一定的淀粉酶活性。与对照组相比,添加0.40 g/L芥子碱培养8 d,SDB1淀粉酶的活力是对照组的2.32倍(P<0.05),添加0.80 g/L芥子碱对SDB1淀粉酶活力没有显著影响。②SDB1具有多酚氧化酶活性。添加0.80 g/L芥子碱,多酚氧化酶活性在培养的第2和4天,分别比对照组增加了75.70%(P<0.01)和197.03%(P<0.01)。③SDB1具有较高的漆酶活性,且漆酶活性有随培养时间延长而增加的趋势。芥子碱可以提高SDB1的漆酶活力。添加0.40和0.80 g/L的芥子碱均可以提高SDB1漆酶活力,其中添加0.40 g/L的芥子碱培养4 d,SDB1漆酶活力是对照组的6.25倍(P<0.01);添加0.80 g/L的芥子碱培养4、6和8 d,漆酶活力分别为对照组的5.92(P<0.01)、3.03(P<0.01)和5.70倍(P<0.05)。④SDB1不具有β-葡萄糖苷酶活性,添加芥子碱对SDB1β-葡萄糖苷酶活力也没有显著影响。⑤SDB1具有一定的乙酰胆碱酯酶活性。与对照组相比,添加0.80 g/L芥子碱培养6 d,SDB1的乙酰胆碱酯酶活性显著降低(P<0.05),添加0.4 g/L芥子碱对SDB1乙酰胆碱酯酶活性没有显著影响。⑥SDB1具有一定的脂肪酶活性。添加0.40、0.80 g/L的芥子碱对SDB1脂肪酶活性没有显著影响。⑦添加1.00和3.00 mmol/L的硫酸铜对SDB1淀粉酶、多酚氧化酶、漆酶、β-葡萄糖苷酶、乙酰胆碱酯酶和脂肪酶活力均没有显著影响。(结论)本试验条件下,SDB1具有淀粉酶、多酚氧化酶、漆酶、乙酰胆碱酯酶和脂肪酶的活性,不具有β-葡萄糖苷酶的活性。在培养基中添加芥子碱,可以在培养的4～8 d内不同程度的提高SDB1淀粉酶、多酚氧化酶、漆酶活性;添加芥子碱对SDB1的β-葡萄糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、脂肪酶活性没有显著影响;添加硫酸铜对SDB1的淀粉酶、多酚氧化酶、漆酶、β-葡萄糖苷酶、乙酰胆碱酯酶和脂肪酶活性均没有显著影响。
全文链接
请求原文
首页上一页1下一页尾页
