科研产出
薄荷UV-B受体基因McUVR8 的克隆与表达分析
2025
摘要：随着城市化和工业化的快速发展，重金属污染对水生生态系统造成不可估量的威胁，并可通过食物链富集效应严重威胁人类生命健康，已然成为全球性关注的环境问题。在此背景下，以生物修复技术为代表的绿色环境治理方案因其环境友好性和可持续发展性而备受关注。藻类作为水生生态系统中的重要初级生产者，具有高度多样性和生态适应性，并通过多种分子机制响应重金属胁迫。莱茵衣藻（
关键词： 薄荷 UV-B受体McUVR8 蛋白特征 蛋白互作 表达模式 生信分析 基因克隆
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桑树花青素合成相关基因MnANS和MnFLS的克隆及其在番茄中过表达分析
《西南农业学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探究桑树（Morus notabilis）花青素生物合成途径中花青素合酶（Anthocyanidin synthase/Leucoanthocyanidin dioxygenase, ANS/LDOX）和黄酮醇合酶（Flavonol synthase, FLS）基因的功能，为桑椹品质改良提供理论基础。【方法】克隆2个桑树花青素合成途径的关键基因MnANS和MnFLS,将这2个基因构建至过表达载体中，并通过农杆菌介导的遗传转化将2个载体转化至番茄Micro-Tom中。【结果】基因和蛋白序列分析表明，桑树MnFLS基因编码含335个氨基酸残基的蛋白，预测分子量为38.3 kDa,等电点为5.91;MnANS基因编码含358个氨基酸残基的蛋白，预测分子量为40.9 kDa,等电点为5.62。MnFLS蛋白和MnANS蛋白均含有Fe2OG-dioxygenase保守结构域。经转基因阳性鉴定，获得含MnFLS和MnANS基因的转基因番茄植株。表型观察结果显示，转MnANS基因番茄植株的茎秆呈深紫色，表明MnANS蛋白对花青素的积累具有潜在影响。转MnFLS基因番茄植株并未表显出明显的表型变化。【结论】通过对转基因番茄植株表型和基因表达量的综合分析，初步揭示MnANS基因在桑树花青素合成中的作用，并为桑树品质改良提供重要的分子生物学信息和进一步研究桑果颜色和花青素代谢工程奠定基础。
关键词： 桑树 花青素生物合成 MnANS基因 MnFLS基因 基因克隆 番茄过表达分析
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桑树花青素合成相关基因MaLAR和MaUGAT的克隆与表达分析
《蚕业科学 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：无色花青素还原酶(leucoanthocyanidin reductase,LAR)是催化无色花青素转化为儿茶素的一个关键酶,是植物类黄酮生物合成路径中的一个下游酶,可抑制无色花青素在花青素合成酶(anthocyanidin synthase,ANS)的催化下转化为花青素;花青素-3-O-葡萄糖苷-2-O-葡萄糖醛酸转移酶(cyanidin-3-O-glucoside 2-O-glucuronosyltransferase,UGAT)是植物花青素生物合成路径中一个关键酶,其催化花青素-3-O-葡萄糖苷转化为花青素3-O-(2-O-β-D-葡萄糖醛酸基)-β-D-葡萄糖苷,使得无色花青素最终转化为稳定的花色苷物质而累积在果实中.通过与川桑(Morus notabilis)基因组数据库进行比对鉴定到了 MaLAR和MaUGAT基因,并以粤椹大10与和田白桑的桑椹cDNA为模板克隆了 MaLAR和MaUGAT基因.聚类分析结果表明粤椹大10 MaLAR与甜樱桃(Prunus avium)亲缘关系较近,和田白桑MaLAR与川桑亲缘关系较近;粤椹大10 MaUGAT与和田白桑MaUGAT均与川桑亲缘关系较近,均属于蔷薇目.实时荧光定量PCR检测表明MaLAR在和田白桑桑椹S1—S3阶段的表达水平均高于粤椹大10;而MaUGAT则在粤椹大10桑椹S2—S3阶段中表达水平显著高于和田白桑.研究表明MaLAR在桑树花青素合成途径中可能起负调控作用,而MaUGAT在桑树花青素合成途径中可能起正调控作用.
关键词： 桑树 无色花青素还原酶 花青素-3-O-葡萄糖苷-2-O-葡萄糖醛酸转移酶 基因克隆 表达分析
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暗紫贝母鲨烯合酶基因的克隆及其组织表达分析
《西南农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】:克隆名贵药材暗紫贝母（Fritillaria unibracteata）鲨烯合酶（Squalene synthase, SQS）基因的全长ORF序列（FuSQS）,并对其进行生物信息学分析和不同组织表达水平分析。【方法】利用PCR方法,克隆得到FuSQS,利用生物信息学方法预测FuSQS蛋白的基本理化性质、保守结构域、二级及三级结构等蛋白特性,利用Clustal W和MEGA 7.0分别进行氨基酸序列对比和系统进化分析,通过Real-time PCR分析FuSQS在暗紫贝母不同组织的表达水平。【结果】FuSQS长度为1230 bp（GenBank登录号MW365404）,编码1条长度为409个氨基酸残基的肽链,相对分子质量为46.84 kDa,等电点（pI）为6.33,含有法尼基焦磷酸结合口袋和Mg2+结合位点等保守结构域。系统进化树表明FuSQS与油棕、宽瓣重楼、水稻、玉米等单子叶植物进化关系较近。Real-time PCR结果显示,FuSQS在不同组织中表达量有显著差异。【结论】FuSQS的克隆、生物信息学分析及其在鳞茎中的高表达特征,这为进一步研究FuSQS在暗紫贝母生物碱生物合成途径的调控机制提供科学依据。
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木霉菌T23胶毒素合成基因的生物信息学分析与克隆
《基因组学与应用生物学 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：胶毒素是生防木霉菌重要的次生代谢产物之一。本研究以生防木霉菌T23为供试材料,旨在通过生物信息学技术及表达分析,挖掘木霉菌T23中胶毒素合成候选基因,探索木霉菌胶毒素合成的分子调控机制,可为新型生物农药的开发及应用提供理论依据。研究表明,木霉菌T23中胶毒素合成候选基因簇全长28 kb,簇内包含了8个基因,分别与烟曲霉胶毒素合成基因簇内的gliP、gliC、gliN、gliK、gliI、gliG、gliF、gliM高度同源。提取培养2 d、3 d、4 d、5 d的木霉菌T23菌丝的RNA,通过半定量RT-PCR技术探索各候选基因在木霉菌T23不同生长时期的表达情况,显示各基因在不同生长时期均有表达,属于组成型表达基因。成功克隆得到木霉菌T23中的gliP-T23基因并完成基因结构分析,该基因全长6 339 bp,由4个外显子和3个内含子组成,为后续的基因功能验证提供基础。
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转录调控因子AtWRKY71的克隆及其序列分析
《种子 》 2018 北大核心
摘要：采用RT-PCR方法,从模式植物拟南芥叶片克隆出转录因子WRKY 71,经过测序及blast同源性分析,结果表明,该序列与GenBank登陆的AtWRKY71序列基本一致,只在起始密码子下游57bp位置由G突变为C,但并不改变氨基酸的编码,说明已经成功克隆转录调控因子AtWRKY71,为后续功能鉴定奠定了基础。
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枇杷EjAO基因的克隆与表达分析
《分子植物育种 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：果实的成熟和衰老是个复杂的生物学过程,一般认为活性氧(ROS)在其中起着重要作用。本研究采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)和RT-PCR相结合的方法,从白肉枇杷成熟期果实中成功克隆到一个编码抗坏血酸氧化酶(AO)的基因,命名为EjAO。该基因全长2 174 bp,包含了长度为1 605 bp的开放阅读框。该阅读框编码的氨基酸数目为534个,所形成的蛋白质预测分子量为59.39 kD。实时荧光定量PCR结果显示EjAO在根和果实中高丰度表达,并且在白肉枇杷成熟期果实中的表达量远远高于红肉枇杷。核苷酸多态性分析显示EjAO基因在红肉枇杷和白肉枇杷共有五处多态性位点,其中T719C和A730C均导致氨基酸发生改变,推测可能对EjAO的酶学活性产生影响。EjAO的克隆和多态性位点的鉴定为阐明枇杷果实成熟与衰老机制及枇杷遗传改良育种提供一定的理论依据。
关键词： 枇杷 抗坏血酸氧化酶 基因克隆 荧光定量PCR 核苷酸多态性
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大蒜叶凝集素基因ASAL的克隆与表达载体的构建
《西南农业学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：大蒜叶凝集素基因(Allium sativum leaf agglutinin,ASAL)是一种高活性的凝集素基因,且具显著的抗虫性。克隆大蒜ASAL基因将为其在转基因作物中抗虫特性研究奠定基础。本文以GenBank公布的ASAL基因序列设计特异引物,采用RT-PCR法从当地大蒜品种二水早和新都软叶的幼苗中克隆ASAL基因。结果表明,克隆的两个ASAL基因与已知基因的碱基序列相似性分别为98.7%和98.9%,氨基酸序列相似性为98.3%。将其亚克隆至表达载体中,经菌落PCR和酶切鉴定,成功构建了重组质粒。将该载体导入农杆菌EHA5a进行保存。
关键词： ASAL基因 刺吸式害虫 基因克隆 表达载体 构建
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