鸡传染性喉气管炎病毒抗原双抗夹心ELISA方法的建立

谢晶; 于吉锋; 肖璐; 吴学婧; 叶勇刚; 魏勇; 李兴玉; 曹冶; 潘梦; 毛从剑; 杨竣雁; 叶健强; 曾子轩; 康玮笠; 康润敏; 《中国动物检疫 》 2025

摘要：为建立鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）抗原的检测方法，利用ILTV gJ蛋白的2株单克隆抗体，1株用作捕获抗体，另1株经辣根过氧化物酶（HRP）标记后用作检测抗体，采用棋盘法优化反应条件，建立了一种检测ILTV抗原的双抗夹心ELISA方法，并对其进行了性能评估。结果显示：捕获抗体的最佳包被质量浓度为2μg/m L，酶标单克隆抗体的最适稀释度为1:4 000；临界值为0.295 6，当待测样品OD_{450 nm}值大于0.295 6且P/N值大于2时，判为阳性；建立的双抗夹心ELISA方法可特异性检测ILTV抗原，而对其他禽类常见抗原的检测结果均为阴性；最低检测限为49.4 ELD₅₀/0.1 mL，批内和批间变异系数均小于10%。48份临床样品的检测结果显示，该方法与行业标准中PCR方法的符合率为93.75%。结果表明，本研究建立的ILTV双抗夹心ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好，可用于ILTV抗原检测。该方法的建立为该病的检测、监测以及防控提供了技术支撑。

关键词： 鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) 单克隆抗体 双抗夹心ELISA