科研产出
马铃薯StSN2信号肽缺失对其定位及蛋白互作的影响
《基因组学与应用生物学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：StSN2属于马铃薯（Solanum tuberosum L.）Snakin/GASA（gibberellic acid-stimulated arabidopsis）蛋白家族，其N端具有信号肽，C端具有12个保守的半胱氨酸残基，主要在植物生长发育和逆境胁迫响应方面发挥重要调控作用。为了明确StSN2蛋白N端信号肽区域对其蛋白亚细胞定位及蛋白互作的影响，本研究首先通过信号肽预测及PCR扩增，获得含信号肽的StSN2基因片段和N端信号肽缺失的StSN2△SP片段，长度分别为315 bp和243 bp。其次，通过酶切连接方法将StSN2△SP基因片段连接在亚细胞定位载体上，获得融合蛋白YFP-StSN2△SP。瞬时表达实验结果发现，N端信号肽缺失后的StSN2△SP蛋白的亚细胞定位发生了变化，只定位在细胞核。最后通过同源重组方式将StSN2以及StSN2△SP分别构建到酵母诱饵载体上，并与pGADT7-SnRK1α进行酵母双杂交实验。结果显示，StSnRK1α与StSN2共转化酵母细胞后，其细胞不能在四缺培养基中生长，而StSnRK1α与N端信号肽缺失的StSN2△SP共转化酵母细胞后，其细胞能在四缺培养基中生长并显色，说明StSN2信号肽缺失后对其亚细胞定位及蛋白互作均有影响。本研究为StSN2蛋白的生物学功能研究提供了理论依据，为进一步完善该基因在马铃薯块茎休眠的功能研究奠定了实验基础。
关键词： 马铃薯 StSN2 信号肽 亚细胞定位 酵母双杂交
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甘蓝型油菜BnPHL12基因克隆及功能分析
《西南农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[目的]在甘蓝型油菜中克隆拟南芥MYB-CC家族转录因子At PHL12的同源基因BnPHL12并进行生物信息学、组织表达模式、亚细胞定位及转录活性研究,为BnPHL12的基因功能研究奠定基础.[方法]利用序列比对方法(BLAST)在甘蓝型油菜泛基因组数据库BnIR中鉴定AtPHL12的同源基因BnPHL12,在"Westar"品系中克隆AtPHL12的同源基因,进行生物信息学及进化分析.利用qRT-PCR及GUS染色方法检测AtPHL12同源基因在不同组织中的表达水平,利用原生质体转化的方法检测BnPHL12的亚细胞定位及转录活性.利用农杆菌侵染介导的转化方法,创建BnA01PHL12过量表达转化植株,并进行BnA01PHL12功能分析.[结果]在"Weatar"材料中克隆到4个AtPHL12的同源基因,命名为BnA01PHL12(705 bp),BnC01PHL12(705 bp),BnA05PHL12(705 bp)和BnC05PHL12(696 bp),分别编码234、234、234、231个氨基酸,与AtPHL12的序列相似性大于70%,均含有保守的MYB DNA结合结构域和Coiled-Coiled结构域.BnA01PHL12与BnC01PHL12分别来源于 白菜的BraA01t04110Z、甘蓝的BolC01g050170.2J.BnPHL12的同源基因在根、茎、叶、花蕾中均有表达,在根和叶的表达水平更高;BnA01PHL12与BnC01PHL12在花药发育的早期和晚期均有较高的表达水平.BnA01PHL12定位在细胞核中并具有转录激活活性.在甘蓝型油菜和拟南芥中,利用绒毡层特异表达基因BnA9启动子驱动BnA01PHL12表达,导致转基因材料雄性不育.[结论]在甘蓝型油菜中,AtPHL12的4个同源基因具有保守的MYB和CC结构域,在营养器官和生殖器官中均有表达.通过在绒毡层细胞中过量表达BnA01PHL12,创制了新的雄性不育材料,为研究花药发育提供良好基础.
关键词： 甘蓝型油菜 AtPHL12 进化分析 亚细胞定位 组织表达分析 雄性不育
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