转G2-EPSPS基因玉米D-3侧翼序列分析与转化体特异性检测方法

张维; 余桂容; 周正富; 李亮; 冯帅; 陈明; 王劲; 《作物杂志 》 2016 北大核心 CSCD

摘要：通过一次3'端高效热不对称交互PCR(hiTAIL-PCR)和一次长链PCR扩增方法获得了转抗草甘膦基因(G2-EPSPS)玉米品系D-3的外源DNA插入片段的全DNA序列(T-DNA)及两端侧翼序列,并建立了转化体特异性PCR检测方法。结果显示:T-DNA插入片段全长4 318bp,由一个G2-EPSPS基因的表达盒构成。根据T-DNA 5'、3'端侧翼序列设计引物,建立了转化体特异性检测方法,并分析了该方法的灵敏度以及检出限,研究结果表明,3'端定性PCR检测方法特异性强,灵敏度高,检出极限为每100ng模板量的0.05%。本研究结果对转抗草甘膦外源基因检测和生物安全评价及监管具有重要意义。

关键词： 转基因玉米 G2-EPSPS 侧翼序列 转化体特异性检测