柑橘类枯草杆菌蛋白酶基因CcSubtilisin的克隆及遗传转化

李菊; 张永艳; 胡敏伦; 闫化学; 姜波; 谢丹; 袁超力; 钟广炎; 《西南大学学报(自然科学版) 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：以克里曼丁橘[Citrus clementina]叶片RNA为材料,采用RT-PCR技术克隆获得了一个编码类枯草杆菌蛋白酶的基因,命名为CcSubtilisin.该基因的开放阅读框(ORF)长度为2 337bp,预测可编码778个氨基酸残基的多肽.分析发现CcSubtilisin与拟南芥、蓖麻、番茄、毛果杨、大豆、挪威云杉、欧洲桤木、百合等18个物种的同源蛋白具有相同的4个保守区域,属于枯草杆菌蛋白酶.通过构建该基因的超表达载体并以沙田柚为材料进行遗传转化,获得了该基因的9个转基因沙田柚株系.实时定量PCR结果表明,4个用于检测的株系中有3株的表达量明显高于对照.

关键词： 丝氨酸蛋白酶 枯草杆菌蛋白酶 基因克隆 序列分析 遗传转化