科研产出
柑橘类枯草杆菌蛋白酶基因CcSubtilisin的克隆及遗传转化
《西南大学学报(自然科学版) 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：以克里曼丁橘[Citrus clementina]叶片RNA为材料,采用RT-PCR技术克隆获得了一个编码类枯草杆菌蛋白酶的基因,命名为CcSubtilisin.该基因的开放阅读框(ORF)长度为2 337bp,预测可编码778个氨基酸残基的多肽.分析发现CcSubtilisin与拟南芥、蓖麻、番茄、毛果杨、大豆、挪威云杉、欧洲桤木、百合等18个物种的同源蛋白具有相同的4个保守区域,属于枯草杆菌蛋白酶.通过构建该基因的超表达载体并以沙田柚为材料进行遗传转化,获得了该基因的9个转基因沙田柚株系.实时定量PCR结果表明,4个用于检测的株系中有3株的表达量明显高于对照.
关键词： 丝氨酸蛋白酶 枯草杆菌蛋白酶 基因克隆 序列分析 遗传转化
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抗虫耐草甘膦双价基因表达载体的构建及玉米转化
《西南农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：本研究对来自苏云金芽胞杆菌BT8的Cry1A(h)基因根据玉米密码子偏好性进行了优化。采用重叠PCR方法获得了优化的Cry1Ah基因与抗除草剂基因2m G2-epsps融合片段,并将其构建到植物表达载体p BI121上,构建p BI121-EPSPS-cryl Ah双元载体。将其转化根癌农杆菌菌株EHA105,获得基因工程菌。结果表明,玉米生产上使用的骨干优良自交系18599、综31等的幼胚作为转基因受体材料,以工程菌将抗虫抗除草剂双价基因转入上述玉米幼胚,经共培养、恢复、筛选、分化、生根、壮苗移栽等培养,苗期除草剂草甘膦涂抹,免疫试纸条检测、抗虫接种鉴定等初筛,再经PCR验证,获得了4株双抗转基因材料。此结果将为抗虫抗除草剂双抗转基因玉米新品种选育提供较好的亲本材料。
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鲨烯合酶RNAi载体构建及对水稻的遗传转化研究
《西南农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：鲨烯合酶(Squalene synthase,SQS)是ABA生物合成途径上游支路的一个关键酶。本研究克隆了406 bp的SQS基因片段,将其分别正向和反向插入干扰载体p YLRNAi.5中,经过酶切鉴定证实成功构建了干扰载体p YLRNAi-SQS,通过农杆菌介导法转入水稻品种Kasalath中,PCR初步鉴定获得了20株转基因阳性植株,进一步通过半定量RT-PCR分析,阳性转基因材料与野生型Kasalath相比,Os SQS3都有不同程度的下调,而Os SQS7变化不明显。证明转入的SQS基因只对Os SQS3起干涉效果,而对Os SQS7无作用,推测水稻中两个SQS基因可能存在不同的作用机制。本研究为进一步研究水稻中Os SQS3和Os SQS7各自的生物学功能奠定了基础,同时也为研究SQS调控ABA的生物合成提供了研究材料。
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农杆菌介导的华南型黄瓜遗传转化体系的初步研究
《西南农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以华南型黄瓜‘二早子’、‘白丝条’、‘川绿2号’近叶柄部子叶为外植体,对影响农杆菌介导的卡那霉素抗性遗传转化体系的主要因素如基因型、不定芽诱导最佳激素配比、筛选压、农杆菌侵染时间、农杆菌侵染浓度、共培养温度等进行试验,建立一个高效的黄瓜子叶遗传转化体系。结果表明,子叶分化再生能力‘川绿2号>‘二早子’>‘白丝条’。1.5 mg/L 6-BA+0.1mg/L TDZ+0.5 mg/L ABA能较好地促进‘二早子、‘白丝条子叶不定芽再生,而"川绿2号"在含1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/LABA的MS培养基就能达到最佳分化率。筛选压与外植体分化能力有关,分化能力强的基因型需要较高的kan筛选压。OD600=0.3,侵染60min,共培养温度26℃时有利于子叶的遗传转化。本研究中,‘二早子’的遗传转化率达到15.46%,‘白丝条’的遗传转化率达到10.2%。
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解放思想 深化改革 大力促进农业科技创新成果转化——关于四川省农业科学院科技创新成果转化的思考
《农业科技管理 》 2014
摘要：在深化科技体制改革过程中,如何充分调动农业科研单位广大科技人员的积极性、主动性、创造性,进一步提升农业科技创新和成果转化能力,促进现代农业发展,是当前政府和农业科研单位需要共同思考的问题。文章以四川省农业科学院为例,分析了农业科技对推动现代农业发展的重要作用及其面临的困境,尤其是在管理体制、运行机制等方面存在的问题,提出了要重点实施的"七大工程"和具体的政策建议,以促进农业科研单位稳步发展和自主创新能力、成果转化能力快速提升。
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转基因水稻外源基因NOS终止子定量测定的不确定度分析
《江西农业学报 》 2013
摘要：为了把测试分析误差控制在允许范围内,保证测试结果有一定的精密度和准确度,使分析数据在给定的置信水平内达到要求的质量,根据JJF 1059─1999《测量不确定度评定与表示》技术规范,估算了转基因水稻外源成分NOS终止子含量测定结果的不确定度。A类评估结果为uA=0.001,B类评估结果为uB=0.008,合成不确定度为uC=0.008,置信水平为95%的扩展不确定度为U95=0.016,NOS终止子含量测量结果为0.1124±0.016。本实验测量结果不确定度分析表明,转基因水稻外源基因NOS终止子含量测定的不确定度主要来自于实验操作中的随机效应、微量移液器转移液体的误差、Ct值与lgA值的线性偏离。因此,在转基因生物安全定量分析中应重点注意上述不确定度来源对测量结果的影响。
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农杆菌介导的转双价基因耐草甘膦玉米研究
《分子植物育种 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：本研究构建了含有耐草甘膦基因G2-epsps和R79-epsps的双价植物表达载体pCMG2R79-EPSPS,以优良玉米自交系78599和综31的幼胚为受体材料,采用农杆菌介导法将耐草甘膦双价基因G2R79-epsps转入玉米幼胚细胞,以期获得耐草甘膦性更高的转基因玉米植株.目前已获得转基因再生玉米植株32株,经特异PCR检测表明其中7株植株转入了目标基因,阳性率达到21.9%.对得到的阳性植株的T1、T2代进行了跟踪检测,经田间喷施除草剂试验结果表明,获得了可耐草甘膦6‰的玉米材料,即生产上草甘膦田间使用浓度3倍水平的材料,为抗除草剂玉米新品种选育提供了较好的基础材料.
关键词： 玉米幼胚 双价基因G2R79-epsps 遗传转化 草甘膦抗性 农杆菌介导
