科研产出
马铃薯StSN2信号肽缺失对其定位及蛋白互作的影响
《基因组学与应用生物学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：StSN2属于马铃薯（Solanum tuberosum L.）Snakin/GASA（gibberellic acid-stimulated arabidopsis）蛋白家族，其N端具有信号肽，C端具有12个保守的半胱氨酸残基，主要在植物生长发育和逆境胁迫响应方面发挥重要调控作用。为了明确StSN2蛋白N端信号肽区域对其蛋白亚细胞定位及蛋白互作的影响，本研究首先通过信号肽预测及PCR扩增，获得含信号肽的StSN2基因片段和N端信号肽缺失的StSN2△SP片段，长度分别为315 bp和243 bp。其次，通过酶切连接方法将StSN2△SP基因片段连接在亚细胞定位载体上，获得融合蛋白YFP-StSN2△SP。瞬时表达实验结果发现，N端信号肽缺失后的StSN2△SP蛋白的亚细胞定位发生了变化，只定位在细胞核。最后通过同源重组方式将StSN2以及StSN2△SP分别构建到酵母诱饵载体上，并与pGADT7-SnRK1α进行酵母双杂交实验。结果显示，StSnRK1α与StSN2共转化酵母细胞后，其细胞不能在四缺培养基中生长，而StSnRK1α与N端信号肽缺失的StSN2△SP共转化酵母细胞后，其细胞能在四缺培养基中生长并显色，说明StSN2信号肽缺失后对其亚细胞定位及蛋白互作均有影响。本研究为StSN2蛋白的生物学功能研究提供了理论依据，为进一步完善该基因在马铃薯块茎休眠的功能研究奠定了实验基础。
关键词： 马铃薯 StSN2 信号肽 亚细胞定位 酵母双杂交
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利用Y2H筛选西方烟中与苹果茎痘病毒CP互作的蛋白
《园艺学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：苹果茎痘病毒(apple stem pitting virus,ASPV)是苹果和梨树上普遍发生的潜隐病毒之一,西方烟(Nicotiana occidentalis)是其重要的草本寄主之一.在本研究中,构建了酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CP(CP-BD),并从西方烟cDNA文库中筛选与ASPV CP互作的蛋白.经通过酵母双杂交回转验证和NCBI BLAST比对,获得30种可能与ASPV CP互作的西方烟蛋白质,为研究ASPV侵染致病的分子机制及CP在侵染过程中的功能打下基础.
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蛋白激发子Hrip1结构解析及其互作蛋白的研究
《2014年中国植物保护学会学术年会论文集 》 2014 CSCD
摘要：在自然界长期进化过程中,植物已经形成了一套复杂的免疫系统以应对病原菌以及外界环境对它的不利影响,病原体相关分子模式(PAMPs)引起的植物免疫(PTI)是通过植物细胞模式识别受体(PRRs)对病程相关蛋白进行识别进而产生快速防御应答反应,包括活性氧暴发、产生过敏(HR)反应、胼胝质的累积及激活水杨酸、茉莉酸信号传递等。前期实验室从极细链格孢菌中筛选分离纯化得到一种新的蛋白激发子,命名为Hrip1。研究表明,该蛋白分子量18kD左右,能引起烟草抗性基因上调表达,防御物质累积等一系列早期防卫信号事件的发生,转Hrip1基因拟南芥研究发现,该基因能提高拟南芥的抗盐、抗旱的能力。本研究优化了Hrip1...
利用酵母双杂交系统研究甘蓝型油菜APX和ATP之间的相互作用
《中国农业科技导报 》 2009
摘要：抗坏血酸过氧化物酶(APX)是植物中抗坏血酸-谷胱甘肽(ASA-GSH)循环中清除逆境条件下产生的H2O2的关键酶之一。为探索APX在细胞质雄性不育(CMS)中的作用机理,本实验通过构建含不同长度的APX cDNA序列的pGADT7融合载体,利用酵母双杂交系统分析ATP6和APX之间的相互作用及其作用位点,结果显示APX的C端250~439位氨基酸序列与ATP6的氨基酸序列具有相互作用。
关键词： 酵母双杂交 甘蓝型油菜(Brasscianapus L.) ATP6 抗坏血酸过氧化物酶
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