三角紫叶酢浆草ISSR反应体系的建立与优化

王永清; 陶炼; 《草业学报 》 2011 北大核心 CSCD

摘要：采用正交设计直观分析法,对影响三角紫叶酢浆草ISSR-PCR反应较大的5个因素(Mg2+、Taq酶、引物、模板DNA、dNTP)在5个水平上进行优化实验;从100个随机引物中筛选出适宜的引物,并筛选出其最佳退火温度;最后对反应程序进行优化。由此首次建立了适合三角紫叶酢浆草的ISSR-PCR反应体系:25μL反应液中含10×buffer 2.5μL,Mg2+1.25mmol/L,Taq酶0.9U,引物0.3μmol/L,模板DNA 60～100ng,dNTP 0.25mmol/L。反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性50s,退火时间60s(根据不同引物选择对应最佳退火温度),72℃延伸1.5min,循环40次;72℃延伸7min,4℃保存。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术研究酢浆草属植物提供理论依据和技术参考。

关键词： 三角紫叶酢浆草 ISSR 反应体系