科研产出
川芎α-淀粉酶抑制剂基因的原核表达与条件优化
《生物学杂志 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：利用实验室前期已获得的α-淀粉酶抑制剂基因(LASI),将其分别连接到不同载体上构建重组原核表达质粒,在原核表达系统中诱导表达LASI重组蛋白,并优化其诱导条件.通过Western Blot分析鉴定LASI重组蛋白,并采用碘-淀粉呈色法测定LASI对猪源淀粉酶的抑制活性.结果表明:pET28a是LASI的较好表达载体,当诱导时间为8 h,IPTG终浓度为1.0 mmol/L,诱导温度为27℃时,LASI重组蛋白的表达量达到最佳;在最优的诱导表达条件下,表达出的部分LASI重组蛋白以可溶性蛋白的形式存在,并能够与HIS标签单抗杂交;经纯化后获得的LASI重组蛋白对猪源淀粉酶存在抑制作用,终抑制比为34%.研究优化LASI重组蛋白的表达条件,获得足量的LASI重组蛋白,为进一步研究LASI的功能奠定基础.
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采用AFLP分析齐口裂腹鱼DNA指纹的技术探讨
《中国测试技术 》 2008
摘要：AFLP(选择性扩增片断长度多态性)指纹技术被认为是当今最有效的DNA指纹分析技术之一,但是由于该技术操作流程较长,对模板DNA质量要求较高以及PCR反应成分等变数条件的影响,要获得高清晰的DNA指纹图谱比较困难。文中以齐口裂腹鱼为研究对象,对AFLP的分析条件作了一定的探索。结果表明:基因组DNA必须是高纯度、高分子量;酶切充分;PCR反应最佳条件为:引物E-XYZ,M-XYZ在体系中的浓度分别为1ng/mL,5ng/mL;dNTPs浓度为0.2mmol/L;MgCl2浓度为1.9mmol/L。银染时在NaOH条件下显色比在传统银染法中的Na2CO3条件下显色,图谱背景更干净,条带更清晰。
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