科研产出
利用多重PCR技术同时检测6种棉花转化体的方法研究
《棉花学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立1种转基因棉花多重聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测方法。【方法】试验选择6种转基因棉花作为多重PCR检测对象,通过引物终浓度配比和引物退火温度的两要素全组合优化多重PCR反应体系,并分析方法灵敏度。【结果】多重PCR较优的MON1445、GHB614、MON15985、MON88913、LLCOTTON25、MON531引物终浓度为0.25、0.30、0.25、0.16、0.30、0.20μmol·L-1,较优引物退火温度为56℃,方法灵敏度为66个拷贝棉花基因组。利用盲样对上述体系的验证结果显示,所有盲样扩增条带与其含有的转基因转化体完全一致。【结论】本研究建立的体系可用于6种棉花转化体的快速检测。
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棉花矮化突变体AS98差异基因表达cDNA-AFLP分析
《西南农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】为了探究矮化突变体AS98发生变异的分子生物学机制,【方法】本研究利用正常陆地棉品种LHF10W99(简称LHF)与AS98杂交后代分离出的正常表现型植株和极端矮化表现型植株,在现蕾期提取2种株型的茎尖、茎和根的RNA,利用cDNA-AFLP技术分析2种植株茎尖的表达差异。【结果】筛选到差异表达的片段32条,对这32条片段进行克隆测序,利用生物信息学进行分析发现其中一条(HD61)与拟南芥的阿拉伯半乳聚糖蛋白的同源性较高。用棉花的阿拉伯半乳聚糖蛋白(Gh AGP)的序列设计引物,用RT-PCR方法检验阿拉伯半乳聚糖蛋白在2类植株的茎尖、茎和根等组织上的表达量,结果表明,Gh AGP基因在突变型和正常型材料的茎、根上的表达量基本相同,但是在茎尖上却表现出明显的差异,突变型茎尖上的表达量显著低于正常型茎尖的表达量,说明Gh AGP可能参与棉花茎尖细胞的伸长生长过程。【结论】AS98的半乳糖代谢的改变可能与赤霉素(GA)合成中基因发生突变有关,不能合成正常具有生物活性的GA,使得阿拉伯半乳聚糖蛋白等基因在AS98茎尖的表达减少甚至缺乏。
抗除草剂棉花LLCOTTON25的多重PCR检测方法
《棉花学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为了建立1种抗除草剂棉花LLCOTTON25多重PCR检测方法,根据抗除草剂棉花LLCOTTON25分子特征,同时选择棉花内源参照基因(SADI)、花椰菜花叶病毒启动子(P-Ca MV 35S)、根癌农杆菌终止子(T-NOS)和目的基因(bar)4个基因作为多重PCR(Polymerase chain reaction)检测基因,参照国家相关标准中的特异性引物序列,通过对反应条件的优化以及方法特异性和灵敏度测试,建立了可同时检测除内源基因外的3种外源目的基因的多重PCR检测体系。利用已知样品对本体系验证,抗除草剂棉花LLCOTTON25能被同时检出SADI、P-Ca MV 35S、T-NOS、bar等4个基因,而其他样品均不能被同时检出这4个基因。结果表明此体系可运用于抗除草剂棉花LLCOTTON25检测。
关键词： 棉花 LLCOTTON25 多重PCR 检测 CaMV 35S T-NOS
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棉花极端矮化突变体AS98性状与分子标记分析
《核农学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：AS98是从一个棉花海陆种间杂交后代中发现的自然突变体,该突变体株高极端矮化,株高仅为25.6cm,叶片为正常阔叶。但是与正常棉花品种LHF10W99比,AS98的铃重、籽指显著减小,净光合速率降低,分别降低68.88%、49.45%和29.69%;遗传分析表明AS98的极端矮化性状受一对不完全显性基因控制;利用SSR和AFLP分子标记方法,以AS98与正常型品种LHF10W99杂交的F2分离群体为分子标记群体,发现一个与该极端矮化性状连锁的SSR标记(GH537)和一个AFLP标记E4M13(E-ACA,M-CGA),与AS98的矮化性状的遗传距离分别为4.9cM和9.7cM。通过对其农艺性状及其分子标记定位研究,可为该材料在棉花育种的应用提供理论指导。
棉花抗病丰产核雄性不育两用系的选育
《安徽农业科学 》 2011 北大核心
摘要：[目的]选育棉花抗病丰产核雄性不育两用系。[方法]利用棉花优良骨干核不育系GA18,选育出了抗病丰产新不育系RA14、RA15。[结果]RA14、RA15均具有育性稳定、败育彻底、配合力高和植株生长势强等特点;组合测配表明,RA14宜与品质优的恢复系搭配,RA15可与大铃的恢复系搭配。[结论]两个新不育系材料各具优点,可选育出不同类型的棉花新组合,为棉花抗病丰产杂交品种选育提供新材料。
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