科研产出
籼稻姊妹染色单体粘着蛋白OsRad21-i基因的原核表达载体构建与表达
《中山大学学报(自然科学版) 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：以杂交水稻汕优63的根组织cDNA为模板,采用引物设计引入酶切位点和RT-PCR方法,扩增出了籼稻姊妹染色单体粘着基因OsRad21-i(AY318757)开放阅读框(ORF),命名为Eqfr,两端分别带有BamHⅠ和SalⅠ限制性位点。然后克隆到pGEM-T载体,将重组克隆载体pGEM-T-Eqfr与表达载体pQE30分别同时进行BamHⅠ和SalⅠ双酶切,连接酶切后的Eqfr和pQE30,并转化DH5α感受态细胞,获得了DH5α[pQE30-Eqfr]重组克隆。再以其重组质粒转化M15[pREP-4]感受态细胞,筛选出M15[pQE30-Eqfr,pREP-4]重组克隆。通过诱导表达,检测到了相对分子质量约为116 000的重组蛋白表达,在诱导后的1~3 h里表达量较高,之后表达量开始下降。用实验证实了理论推测ORF的正确性,所获得的表达蛋白及其表达体系为下一步的蛋白质实验奠定了基础。
关键词： 杂交籼稻 姊妹染色单体粘着蛋白 OsRad21-i 原核表达 载体构建
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