中国兰SRAP-PCR体系的建立及优化

蒋彧; 李萍; 王海娥; 何俊蓉; 刘菲; 卓碧萍; 袁宁; 《西南农业学报 》 2010 北大核心 CSCD

摘要：序列相关扩增多态性(SRAP)是新一代的分子标记技术,尚未在兰花中应用过。本实验运用改进了的CTAB法提取国兰总DNA,并L16(45)正交设计,对影响中国兰PCR反应的4个因素(引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、扩增模版)在4个水平上进行优化试验,结果采用DPS软件分析。结果表明,在25μl总体积中,Taq酶为1个单位的情况下,中国兰SRAP-PCR反应最佳扩增体系为:Mg2+2 mmol.L-1、DNA模版100μg、dNTPs 0.25 mmol.L-1、引物0.3μmol.L-1。这一优化的SRAP-PCR体系的建立为后续国兰SRAP分析奠定基础。

关键词： 国兰 SRAP-PCR 正交设计 反应体系